[发明专利]用于检测耐碳青霉烯类肠杆菌试剂盒与检测方法

权利要求书

1.用于检测耐碳青霉烯类肠杆菌的试剂盒，其特征在于，包括 下述检测引物对中的至少一对：

检测引物对1：

KPC上游引物为：5’-ATCGCCGTCTAGTTCTGCTG-3’，如SEQIDNO.1 所示，

KPC下游引物为：5’-TATCCATCGCGTACACACCG-3’，如SEQIDNO.2 所示；

检测引物对2：

NDM上游引物为：5’-GCAAATGGAAACTGGCGACC-3’，如SEQIDNO.4 所示，

NDM下游引物为：5’-TCAAACCGTTGGAAGCGACT-3’，如SEQIDNO.5 所示；

检测引物对3：

IMP上游引物为：5’-TTCAGTTGGTTCAGTTGTTGGTG-3’，如SEQID NO.7所示，

IMP下游引物为：5’-TGGATTAAATAGCCAAACTGACGC-3’，如SEQID NO.8所示；

检测引物对4：

VIM上游引物为：5’-ACCAGATTGCCGATGGTGTT-3’，如SEQIDNO.10 所示，

VIM下游引物为：5’-TCGTCATGAAAGTGCGTGGA-3’，如SEQIDNO.11 所示；

检测引物对5：

OXA‐48上游引物为：5’-GGGCGATCAAGCTATTGGGA-3’，如SEQID NO.13所示，

OXA‐48下游引物为：5’-GGCTGTGTTTTTGGTGGCAT-3’，如SEQID NO.14所示。

2.根据权利要求1所述用于检测耐碳青霉烯类肠杆菌的试剂盒， 其特征在于，包括至少一个对应与上述检测引物对匹配的检测探针，

与检测引物对1匹配的检测探针为KPC探针：

KPC探针：5’-荧光标记物1/GGCCGCTGGCTGGCTTTTCTGCCAC/淬灭 剂-3’，如SEQIDNO.3所示；

与检测引物对2匹配的检测探针为NDM探针：

NDM探针：5’-荧光标记物2/TCGCACCGAATGTCTGGCAGCACA/淬灭 剂-3’，如SEQIDNO.6所示；

与检测引物对3匹配的检测探针为IMP探针：

IMP探针：5’-荧光标记物3/TAATTGCTTATTTTGCGTCAGTTTGGC/ 淬灭剂-3’，如SEQIDNO.9所示；

与检测引物对4匹配的检测探针为VIM探针：

VIM探针：5’-荧光标记物4/TCGTTTGATGGCGCAGTCTACCCGTCC/ 淬灭剂-3’，如SEQIDNO.12所示；

与检测引物对5匹配的检测探针为OXA-48探针：

OXA-48探针：5’-荧光标记物 5/ATTATTGGTAAATCCTTGCTGCTTATTC/淬灭剂-3’，如SEQIDNO.15所 示；

所述荧光标记物1至荧光标记物5选自不同的荧光标记物。

3.根据权利要求2所述用于检测耐碳青霉烯类肠杆菌的试剂盒， 其特征在于，还包括PCR反应混合液,

PCR反应混合液：Buffer10×缓冲液8μL、检测引物对、检测 探针0.3μM和dNTP各组分0.8mM；

检测引物对包括KPC检测引物对、NDM检测引物对、IMP检测引 物对、VIM检测引物对和OXA‐48检测引物对，其中的上、下游检测 引物分别为0.3μM。