[发明专利]耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag及其制备方法有效
| 申请号： | 201610023932.7 | 申请日： | 2016-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN105483102B | 公开（公告）日： | 2018-09-25 |
| 发明（设计）人： | 周峻沛;张蕊;黄遵锡;宋志凤;唐湘华;李俊俊;吴倩 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12R1/19;C12R1/07;C12R1/85;C12R1/225 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 裴娜 |
| 地址： | 650500 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 产物 抑制 乙酰 葡糖 hj5nag 及其 制备 方法 | ||
1.一种耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶，其特征在于，所述耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶总共含535个氨基酸，理论分子量为55.89kDa，其中N端有25个氨基酸为预测信号肽序列MNRRRGRAIAAATVLAASLAGCSPA，成熟的β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag含510个氨基酸。
2.一种编码权利要求1所述的β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag的β-N-乙酰葡糖胺酶基因hJ5nag，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种如权利要求1所述耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的制备方法，其特征在于，所述耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的制备方法包括以下步骤：
首先用包含β-N-乙酰葡糖胺酶基因hJ5nag的重组载体，重组载体为pEasy-E2-hJ5nag，将乙酰葡糖胺酶基因插入到表达载体中，使核苷酸序列与表达调控序列相连接，重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；
然后培养重组菌株，诱导重组β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag表达；
最后回收所表达的β-N-乙酰葡糖胺酶HJ5nag。
4.如权利要求3所述耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌细胞，将重组大肠杆菌表达质粒转化大肠杆菌细胞BL21(DE3)，得到重组菌株BL21(DE3)/hJ5nag。
5.一种包含权利要求1所述耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的重组载体。
6.如权利要求5所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体是将β-N-乙酰葡糖胺酶的基因插入到表达载体中，使核苷酸序列与表达调控序列相连接。
7.一种包含权利要求1所述耐产物抑制的β-N-乙酰葡糖胺酶的重组菌株。
8.如权利要求7所述的重组菌株，其特征在于，所述重组菌株为大肠杆菌、酵母菌、芽孢杆菌或乳酸杆菌。
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