[发明专利]一种树鼩单纯疱疹病毒性角膜炎HSK模型的构建、评估方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种树鼩单纯疱疹病毒性角膜炎模型的构建、评估方法及 其应用，属于人类疾病动物模型技术领域。

技术背景

单纯疱疹病毒(Herpessimplexvirus,HSV)是自然界广泛存在易感染人类的 传染性病毒，超过80％的全球人口感染过单纯疱疹病毒，单纯疱疹病毒分为两种 基因型，即I型和II型单纯疱疹病毒。Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染部位是 头颈部，可引起多种人类疾病，包括口唇疱疹，龈口炎，角膜炎，甚至引起脑炎。 Ⅱ型的感染部位是生殖器，偶或也引起眼部感染。Ⅱ型感染新生儿，除累及眼部 还可波及皮肤、血液、内脏和中枢神经系统，并可致命。人是HSV唯一的自然 宿主，大多数人在幼儿时期就被HSV感染，在此之后，病毒终身潜伏在三叉神 经节(trigeminalganglion,TG)的感觉神经元内。

单纯疱疹病毒感染引起的角膜炎症称为单纯疱疹病毒性角膜炎(Herpes simplexkeratitis,HSK)，眼部HSV感染主要由HSV-1引起。HSV-1角膜炎是常 见、且严重的角膜病，也是当今危害严重的感染性眼病之一。它是由病毒感染、 免疫与炎症反应参与、损伤角膜及眼表组织结构的复杂性眼病，感染HSV-1后， 多数人没有明显症状，少数发展成有危害的疱疹病毒性角膜炎。复发的角膜感染 引起眼睛发病，导致不可逆的角膜瘢痕形成，变薄，新生血管生成，最终失明， 其复发的详细机制尚不清楚。

HSV-1感染眼睛及相关的后遗症是传染性角膜发病和致盲的主要原因，疱疹 病毒的感染情况，可追溯到几千年前，至今人类仍然饱受这种病毒的折磨。尽管 已经进行了四十多年的HSK研究，主要的治疗方法仍旧是局部疗法，现在更多 是全身性的阿昔洛韦给药，联合局部的皮质激素治疗。即使进行角膜移植术治疗 后，病人仍然大部分复发HSK，且诊断出这些病人有HSV再激活现象，因此， 疱疹病毒性角膜炎易复发，很难根治，迫切需要建立合适的动物模型，研究其病 毒潜伏及再激活机制，为疱疹病毒性角膜炎的治疗以及药物筛选提供基础依据。

目前，小鼠和家兔等啮齿类是主要的用于疱疹病毒性角膜炎研究的模型动物， 但由于小鼠的角膜很小，很难进行手术操作，感染后可取材的标本少，而且不利 于病毒感染大体形态学的观察。此外，小鼠模型缺乏对病毒的临床再激活能力。 家兔模型与人类感染的免疫反应差异大，且家兔实验成本高。因此，迫切需要建 立一个更接近于人的灵长类动物模型，来模拟人类单纯疱疹病毒性角膜炎的发生、 发展过程，为疱疹病毒性角膜炎的治疗提供理想的动物模型。

树鼩(Tupaiabelangeri)在分类学上属哺乳纲，有胎盘类，是一个独立的目， 称为攀鼩目(Scandentia)，介于灵长目与食虫目之间。树鼩具有体型小，易饲养 和操作，管理方便，廉价经济，且其进化程度高，新陈代谢和大体解剖比犬、大 小鼠等动物与人更为接近，解剖结构也更近似于人，特别是树鼩角膜结构和人角 膜非常类似。为此，我们拟通过建立树鼩HSV-1角膜炎模型来模拟人类单纯疱 疹病毒性角膜炎的感染，研究调控病毒潜伏的机制及病毒性角膜炎临床治疗研究； 通过非人灵长类模型获得的基础数据更有助于临床治疗的筛药研究，将会带来很 大的社会和商业效益。

发明内容

鉴于现在对HSV角膜炎实验动物模型开发的需求，本发明拟设计一种树 鼩HSV角膜炎模型的建立及评估方法，通过HSV-1病毒经眼睛接种感染树鼩， 建立树鼩单纯疱疹病毒性角膜炎模型，为研究疱疹类病毒性角膜炎的感染机制， 致病机理及药物治疗研究提供更好的实验动物模型。

本发明的技术方案：一种树鼩单纯疱疹病毒性角膜炎模型的构建方法是将 HSV-1病毒经树鼩眼睛接种感染HSV-1病毒，建立树鼩单纯疱疹病毒性角膜炎 模型，包括以下步骤：

(1)实验动物准备：准备6月-3岁龄雌性成年健康树鼩；

(2)树鼩的麻醉及处理：用氯胺酮麻醉动物，将树鼩固定于专用的小布袋 中，称量并记录其体重，在树鼩大腿内侧肌肉丰厚处注射盐酸氯胺酮，5分钟后， 树鼩处于麻醉状态；

(3)病毒感染：将HSV-1病毒滴加到树鼩两只眼膜上，即可得到树鼩单纯 疱疹病毒性角膜炎模型。

其中，步骤(3)中所述的HSV病毒为野生型HSV-117⁺或HSV-1McKrae毒 株。