[发明专利]细菌超氧化物歧化酶及其制备方法

权利要求书

1.一种细菌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，该细菌超氧化物歧化酶包括酶液和酶粉两种形式，由保藏编号为CCTCC NO:M 2015633的格氏乳球菌(Lactococcusgarvieae)发酵培养制备得到，包括以下步骤：

(1)格氏乳球菌的活化：将格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)在琼脂-M17培养基上活化；

(2)格氏乳球菌种子液的制备：将活化后的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)接种于液体培养基中培养得到格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)种子液；所述液体培养基为M17肉汤培养基；

(3)格氏乳球菌的发酵培养：将格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)种子液接种于发酵培养基中发酵培养后，离心收集的发酵湿菌体直接用于下一步超氧化物歧化酶的制备，或者将离心收集的发酵湿菌体冻干得到冻干菌粉；所述发酵培养基的成分包括：0.1～10wt％的碳源，0.1～10wt％的氮源，0～5wt％氮源以外的无机盐；其中，所述碳源选自0.1～10wt％葡萄糖、0.5wt％蔗糖，氮源选自1wt％蛋白胨、1～10wt％酵母浸膏，氮源以外的无机盐选自0.1～0.8wt％硫酸氢二钾、0.02～0.1wt％硫酸镁、0.1wt％硫酸铵；

(4)超氧化物歧化酶的制备：将步骤(3)收集的发酵湿菌体或者冻干菌粉，悬浮于pH为7.2-8.5的磷酸缓冲液中，加入溶菌酶裂解2～24h，离心，将上清液调节pH为4.0～5.6，冰冷放置1-3h，离心除沉淀，即得细菌超氧化物歧化酶酶液；或将酶液冻干即得细菌超氧化物歧化酶酶粉。

2.根据权利要求1所述的细菌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述琼脂-M17培养基中的琼脂含量为1～2wt％，活化的时间为12h～60h，活化的温度为20℃～45℃。

3.根据权利要求1所述的细菌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述液体培养基为M17肉汤培养基，培养的时间为12h～196h，培养的温度为20℃～45℃，培养的转速为0rpm～280rpm。

4.根据权利要求1所述的细菌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，步骤(3)将格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)种子液按体积比为0.1％～10％的接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养，发酵培养的温度为20℃～45℃，发酵培养的时间为12h～196h，发酵培养的转速为0rpm～280rpm。

5.根据权利要求1所述的细菌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，步骤(2)和/或步骤(3)的培养在严格厌氧的条件下进行。

6.根据权利要求1所述的细菌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述溶菌酶的质量为步骤(3)所得发酵湿菌体质量的0.1％-1％。