[发明专利]一种水蛭生物活性小肽药物组合物的组成及制备方法

权利要求书

1.一种用于祛斑美白的水蛭小肽有效部位组合物，其特征在于是由从水蛭中提取的水 蛭小肽、从白芷中提取的白芷总香豆素、从芦荟中提取的芦荟总多糖、从银杏叶中提取的银 杏总黄酮和从蚕丝中提取的丝素小肽组成的，其中，各有效部位的重量配比为：

水蛭小肽3～9重量份

白芷总香豆素3～10重量份

芦荟总多糖2～5重量份

银杏总黄酮5～15重量份

丝素小肽1～3重量份。

2.如权利要求1所述的水蛭小肽有效部位组合物，其特征在于各有效部位的重量配比 为：水蛭小肽6重量份、白芷总香豆素7重量份、芦荟总多糖3重量份、银杏总黄酮10重量份、 丝素小肽2重量份。

3.如权利要求1或2所述的水蛭小肽有效部位组合物，其特征在于其制备方法包含以下 步骤：

①水蛭小肽的制备：取水蛭，适当粉碎，加5～20倍量水匀浆5～15min，加热煮沸5～ 30min，放冷至室温，采用盐酸调pH至2.0±0.1，然后加入底物量0.5%～10%的胃蛋白酶，在 30℃～45℃条件下酶解1～6h，然后采用氢氧化钠溶液调节pH至7～10，加入底物量0.5%～ 10%的胰蛋白酶，在45℃～55℃条件下酶解1～6h，时时搅拌并调节pH在7～10范围内，酶解 完毕后继续升温煮沸5～15min，放冷，离心，收集上清液，调节pH6.5～7.0，加入1%～3%的活 性炭，搅拌均匀，滤过，滤液用截留相对分子质量为3kD的中空纤维膜进行超滤，收集透过 液，再以截留相对分子质量为150D～300D的陶瓷膜进行纳滤，收集未透过液，减压浓缩，干 燥，得水蛭小肽；其中水蛭小肽的含量为50%～90%；

②白芷总香豆素的制备：取白芷，用8～10倍60%～80%乙醇提取2～3次，每次提取1～2 小时，乙醇提取液回收溶剂，用20%～40%乙醇溶散均匀后上AB-8树脂柱，上样液浓度为0.8 ～8mg/mL，以总香豆素计上样量为1.6～9.5mg/mL，树脂柱的径高比为1∶6～1∶10；吸附流速 为3～9ml/min；上样后用5～8BV、浓度30%～50%的乙醇除杂，除杂流速为0.5～2ml/min；最 后用5～8BV70%～95%的乙醇洗脱，洗脱流速为1～3ml/min，收集洗脱液，回收溶剂，得白芷 总香豆素提取物；其中欧前胡素的含量为3%～5%；

③芦荟总多糖的制备：将芦荟鲜叶切成小块状，加入10～12倍量的蒸馏水，在40～80 ℃下提取3次，每次提取1～3小时，滤取提取液，将合并后的提取液浓缩至总体积的1/13-1/ 30，离心，取上清液，在上清液中加入95%乙醇，使得溶液中乙醇含量达到50%～80%，沉淀出 粗芦荟多糖，将粗芦荟多糖溶于水，加入20%～50%三氯乙酸或三氟乙酸，使得三氯乙酸或三 氟乙酸的最终浓度达到2%～6%，0℃～4℃静置过夜后离心去除沉淀，得二次上清液，然后将 二次上清液上聚苯乙烯大孔吸附树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，合并流出液，并 浓缩至粗芦荟多糖质量的5～10倍后，加入75%～95%乙醇，使溶液中乙醇含量达到55%～ 85%，沉淀出多糖，冷冻干燥，得到芦荟多糖；其中芦荟总多糖的含量为90%～100%；

④银杏总黄酮的制备：取新鲜银杏叶，洗净，晾干，于70℃～80℃烘箱中，烘8～12h，取 出置于干燥箱内冷却,用粉碎机粉碎过100～200目筛，然后取银杏叶粉于60%～80%乙醇中， 在水浴锅内加热到60℃～70℃，浸提1～2h，每5～10min搅拌一次，用纱布过滤，残渣中再加 入60%乙醇，60℃～70℃继续浸提1～2h，每5～10min搅拌一次，纱布过滤，合并浸提液，将浸 提液进行抽滤，回收溶剂，得到银杏总黄酮；其中银杏总黄酮的含量为80%～95%；

⑤丝素小肽制备：取蚕丝，置于0.5%～1%碳酸钠沸溶液中处理15～30min，取出蚕丝并 用水反复洗涤后拧干，置于质量浓度为40%～50%的氯化钙沸溶液中处理5～10min，至溶解 完全，再放入8～14kDa透析袋中，用蒸馏水透析48～72h，加入0.5%～1.5%的碱性蛋白酶，用 NaOH调整溶液pH=8～9，将溶液置于35℃～50℃、80～120r/min的摇床中振荡处理1h后，用 颜色中和，再将溶液用透析袋透析纯化，得到丝素小肽溶液，减压浓缩，干燥，得到丝素小 肽；其中丝素小肽的含量为30%～70%；

⑥按照各有效部位的重量配比取上述五份有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅 料，制成药学上可以接受的剂型。

4.权利要求1或2所述的水蛭小肽有效部位组合物用于祛斑美白。