[发明专利]一种食品致病菌PCR扩增产物的快速检测方法

权利要求书

1.一种食品致病菌PCR扩增产物的快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：将待测食 品致病菌PCR扩增产物中加入50μM血晶素溶液后，于37℃反应10min后形成G-四联体，然 后加入TMB显色液，在室温下孵育5-10min直至溶液颜色变成蓝色，用0.16M的H₂SO₄溶液 终止后，通过颜色变化确定待测样品中是否含有食品致病菌，其中所述的待测食品致病菌 PCR扩增正向引物或者反向引物的5’端链接有辣根过氧化酶互补序列，所述的辣根过氧化 酶互补序列的基因序列为AAAAAATTTACCCAACCCGCCCTACCCAAAAAATTTACCCAACCCGCCCTACCC AAAAA。

2.根据权利要求1所述的一种食品致病菌PCR扩增产物的快速检测方法，其特征在于： 所述的待测食品致病菌PCR扩增产物、所述的血晶素溶液、所述的TMB显色液与所述的H₂SO₄溶液的体积比为5：1：4：25。

3.根据权利要求2所述的一种食品致病菌PCR扩增产物的快速检测方法，其特征在于： 所述的TMB显色液的配方为8μLHEPES缓冲液，4μL500mM的KCl溶液，4μLH₂O₂。

4.根据权利要求1所述的一种食品致病菌PCR扩增产物的快速检测方法，其特征在于所 述的待测食品致病菌PCR扩增体系中致病菌DNA模板采用磁珠法提取，具体步骤如下：

（1）取1mL待测食品致病菌菌液，10000r/min离心5min，去上清，沉淀溶于1mL细菌 裂解液中，振荡15s，70℃水浴12min，以5000r/min离心，得到1mL细胞裂解清液；

（2）在1mL细胞裂解清液中加入10μL磁性纳米粒子，涡旋5s，然后再加入600μL吸附 缓冲液混匀，振荡反应15min，磁性分离去上清；

（3）用1mL70wt%乙醇溶液清洗MNPs两次，室温放置30min，使乙醇挥发完全；再加入50 μL洗脱缓冲液TE，混匀后静置10min，65℃水浴10min，磁分离，取上清，即为待测食品致 病菌DNA模板溶液，-20℃备用。