[发明专利]一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备方法

权利要求书

1.一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：

A)、培养基制备：将大米进行粉碎制得米粉，然后将所述米粉先与山药粉、葛根粉、薏米粉混合后再与蒸馏水混合制得固体培养基，最后对所述固体培养基先后进行灭菌、松散；所述固体培养基中米粉、山药粉、葛根粉、薏米粉和蒸馏水的质量比为(85-88)∶(5-10)∶(3-5)∶(1-3)∶40；

B)、接种：将红曲霉菌种接种至所述固体培养基；

C)、培养：培养过程依次分为第一阶段、第二阶段和第三阶段；第一阶段：将培养基先在30-35℃下培养3-5天；第二阶段：在25-30℃下培养5-10天，第三阶段：在20-25℃下培养10-20天；其中，第一阶段培养2天时，向固体培养基中添加培养液a，所述培养液a由2-4wt％的大豆油和余量的蒸馏水组成，培养液a的添加量为固体培养基的6-8wt％；第二阶段培养3天时，向固体培养基中添加培养液b，所述培养液b由0.5-1.5wt％的油酸和余量的蒸馏水组成，培养液b的添加量为固体培养基的4-6wt％；

D)、烘干：将步骤C)后的固体培养基在45-65℃下进行烘干5-8h，烘干后制得用于抗阿兹海默症功能性红曲；

其中，所述红曲霉菌种经过驯化：

选取红曲霉菌，在30℃下培养于PDA斜面上3天；

紫外线照射驯化：取5mL上述培养的浓度为10⁶spores/mL的红曲霉菌液均匀涂布于平板上，并利用15W的紫外灯以20-40cm距离对所述红曲霉菌液进行照射直至红曲霉菌的致死率达到90％，照射后将红曲霉菌液于暗室内静置30min，然后将红曲霉菌液进行离心并用无菌生理盐水洗涤三次后涂布于PDA培养基上，在30℃下培养3-4天，待单菌落形成后转接至斜面培养基上保存，筛选后以进行代谢活性物质Monacolin K的产量分析，选取一株Monacolin K产量最高的红曲霉菌株并标记为Monascus shsw-123；

硫酸二乙脂化学诱变处理：取2.5mL浓度为30μL/mL的硫酸二乙脂并加入2.5mL浓度为10⁶spores/mL的Monascus shsw-123菌液，摇匀后置于30℃下反应直至Monascus shsw-123的致死率达到90％，然后立即加入1000mL无菌水以终止反应，之后经过离心，并用无菌水洗涤三次后涂布于PDA培养基上，于30℃培养3-4天，待单菌落形成后转接至斜面培养基上保存，筛选后以进行代谢活性物质Monacolin K的产量分析，选取一株Monacolin K产量最高的红曲霉菌株并标记为Monascus shsw-267；

亚硝基胍化学诱变处理：取2.5mL浓度为100μg/mL的亚硝基胍并加入2.5mL浓度为10⁶spores/mL的Monascus shsw-267菌液，摇匀后置于30℃下反应直至Monascus shsw-267的致死率达到90％，然后立即加入1000mL无菌水以终止反应，之后经过离心，并用无菌水洗涤三次后涂布于PDA培养基上，于30℃培养3-4天，待单菌落形成后转接至斜面培养基上保存，筛选后以进行代谢活性物质Monacolin K的产量分析，选取一株Monacolin K产量最高的红曲霉菌株并标记为Monascus shsw-308。

2.如权利要求1所述的一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备方法，其特征在于，步骤A)中的灭菌温度为120-122℃，压力为0.11-0.12MPa，时间为30-45min。

3.如权利要求1所述的一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备方法，其特征在于，步骤B)中所述红曲霉菌种为固含量为8-12wt％的液体种，且每100g固体培养基的红曲霉菌种接种量为10-20mL。

4.如权利要求1所述的一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备方法，其特征在于，步骤C)培养过程中环境湿度控制在50％-80％，并每隔12小时进行进风与排风换气。

5.如权利要求1或2或3所述的一种用于抗阿兹海默症功能性红曲的制备方法，其特征在于，所述红曲霉菌选自丛毛红曲霉、紫红曲霉或安卡红曲霉中的一种。