[发明专利]适用于时间分辨荧光免疫法的加样方法

说明书

技术领域

本发明属于时间分辨荧光免疫分析技术领域，尤其涉及适用于时间分辨荧光免疫法的加样方法。

背景技术

时间分辨荧光免疫分析法测定样本中物质的含量时，其步骤通常包括：

1)加样：在容器中将标记物与缓冲液混合均匀，配制标记物工作液；然后将样本加入固相载体包被反应板中，向每孔中加入配制好的标记物工作液；

2)反应板在室温下，缓慢振荡孵育；

3)用上述的工作洗涤液洗板，拍干；

4)向每孔中加入增强液；将抗体固相载体于室温下缓慢振荡后检测。

其中，第一步的加样方法至关重要，影响着测定结果的准确性和稳定性。对于目前的加样方法来说，为了使标记物充分与样本的待测物质结合，尽可能提高样本的分析准确性，通常将标记物通过缓冲液稀释至较低浓度，然后向固相载体包被反应板加入多于100μL体积的标记物工作液。

这种的操作方法由于多种试剂均需要由操作者在每次检测前配制，必须增加因加样引起的误差和由于操作者不同操作或操作批次不同所造成的误差。另一方面，由于参与反应的各种试剂及缓冲液之间常常会发生某种化学反应，或者是某些试剂与缓冲液配制到说明书要求的工作浓度后，影响测定结果的稳定性，因此不能在操作前将待加样试剂和缓冲试剂混合保存。同时，由于引入了一个中间容器，这样的加样方法不但操作繁琐，更使操作时间延长，而且增加了引入污染的可能性，往往导致反应产生假阳性或假阴性结果，造成实验失败。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，降低各实验室之间关于同一检验和/或实验因不同操作者甚至同一操作者不同批次操作造成的上述误差，提高实验结果的精确度、可信性以及实验的反应时间，本发明提供了一种适用于时间分辨荧光免疫分析的加样方法。

本发明采用的技术方案为：一种适用于时间分辨荧光免疫法的加样方法，包括：将样本加入固相载体包被反应板中，向每孔中加入缓冲液，然后加入标记物工作液，所述标记物工作液的浓度允许在所述缓冲液与标记物工作液的体积均不大于50μL时与固相载体充分结合。

优选地，所述样本中的待测物质为甲胎蛋白、新生儿促甲状腺激素、风疹病毒IgM、弓形虫IgM、巨细胞病毒IgM和单纯疱疹病毒IgM中的至少一种。

优选地，当所述样本中的待测物质为甲胎蛋白时，所述加样方法为：将样本加入固相载体包被反应板中，向每孔中加入20～30μL缓冲液，然后加入3～7μL标记物工作液；其中，所述标记物工作液通过将甲胎蛋白单克隆抗体与镧系元素离子螯合物按5:1～5的质量比混合制得母液，再将母液用缓冲液稀释200～300倍而成。

更优选地，所述缓冲液的制备方法为：在含0.01g/L的乙二胺四乙酸二钠的50mmol/L、pH7.8的Tris-Hcl溶液中加入10.0ml/L～200.0ml/L的小牛血清、牛γ-球蛋白和鼠IgG中的至少一种。

优选地，当所述样本中的待测物质为新生儿促甲状腺激素时，所述加样方法为：将样本加入固相载体包被反应板中，向每孔中加入40～50μL缓冲液，然后加入40～50μL标记物工作液；其中，所述标记物工作液通过将促甲状腺激素单克隆抗体与镧系元素离子螯合物按10:5～10的质量比混合制得母液，再将母液用缓冲液稀释300～400倍而成。

更优选地，所述缓冲液的制备方法为：在含0.01g/L的乙二胺四乙酸二钠的50mmol/L、pH7.8的Tris-Hcl溶液中加入10.0ml/L～200.0ml/L的小牛血清、Tween40和鼠IgG中的至少一种。

优选地，当所述样本中的待测物质为新生儿风疹病毒IgM时，所述加样方法为：将样本加入固相载体包被反应板中，再立即向每孔中加入20～30μL生物素化抗原，孵育5～10min，再向每孔中加入20～30μL缓冲液，然后加入20～30μL标记物工作液；其中，所述标记物工作液通过将链霉亲和素与镧系元素离子螯合物按1:1～5的质量比混合制得母液，再将母液用缓冲液稀释500～1000倍而成。

更优选地，所述缓冲液的制备方法为：在含0.01g/L的乙二胺四乙酸二钠的50mmol/L、pH7.8的Tris-Hcl溶液中加入10.0ml/L～200.0ml/L的小牛血清和鼠IgG中的至少一种。