[发明专利]解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种及其固态菌剂的制备与应用

说明书

技术领域

本发明属于利用微生物及其代谢产物提高原油采收率的三次采油技术领域，具体涉及解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种及其固态细菌制剂的制备与应用。

背景技术

石油是工业经济的血液，石油储量及产量关系到国家经济、社会可持续发展与国防安全。目前，通过一次及二次采油，原油采收率约为地质储量的30％左右，尚有大量的残留原油有待通过新技术进行开采。利用物理化学技术提高原油采收率已有大量研究及应用，但现有技术对大量存在的低渗、稠油等特殊油藏效果不佳。

限制原油采收率提高的主要因素为：一是原油中的沥青、胶质、蜡质等高分子烃粘度大、流动性差；二是原油紧密附着在储油层的多孔载体上，不易流动；三是原油中含有大量石蜡，随着原油的开采，石蜡从地层深处向表层流动时，随着温度的降低，其凝结沉积在井壁及油管壁上，形成堵塞，影响原油开采的产量及管道运输。因此可通过降解原油中高分子组分、降低原油粘度、减轻石蜡沉积堵塞来提高原油流动性来提高原油采收率。

微生物采油技术是包括微生物生长、运移及新陈代谢等复杂过程在内的生物学和物理化学综合技术，具有多重作用及综合效果，主要包括微生物地面发酵和微生物地下发酵两大类，其地下发酵是把油层作为巨大的生物反应器，将配伍性较好的外源微生物注入其中，利用微生物在地下油层中生长繁殖及其代谢产物的综合作用提高采收率。地下发酵需要向油藏地层注入大量微生物菌剂，所用的外源微生物为细菌，其产品为液体发酵生产的液态细菌制剂，需要的细菌菌剂数量极大。然而液态细菌制剂不能长期贮存，体积大，运输不便，严重制约了驱油细菌在生产上的广泛应用。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一株解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种及其固态菌剂的制备与应用，可用于对原油或石蜡的降解，进而提升原油的采收率。

为了达到以上目的，本发明采用以下技术方案予以实现。

(一)一株芽孢杆菌，分离自安塞油田、志丹油田的原油及油污土壤中，于2015年12月11日保藏于武汉市武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM2015740，命名为解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c(Bacillusamyloliquefacienssubsp.Amyloliquefaciens6-2c)。

解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c的16SrDNA序列分析：通过PCR反应，从解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c的16SrDNA序列中扩增得到1.6kb的基因片段，将PCR产物纯化后，由南京金斯瑞生物科技有限公司进行测序。通过与Genebank中其他菌株16SrDNA序列进行对比分析，发现该芽孢杆菌6-2c与Bacillusamyloliquefacienssubsp.amyloliquefaciensFN597644的16SrDNA序列同源性达到99.78％，确认该芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp.amyloliquefaciens)。

解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c的形态特征：菌落直径较大，白色，圆形，边缘不整齐，表面光滑湿润，不透明，稍向上隆起，电镜下细胞呈长杆状，宽0.5～1.0μm，长2.0～3.0μm。

(二)一种芽孢细菌制剂，其特征在于，以解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c为活性成分。

所述芽孢细菌制剂为固态细菌制剂。

(三)一种以解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c为活性成分的芽孢细菌制剂的制备方法，其特征在于，采用液态-固态两步发酵法，具体包括以下步骤：

步骤(1)，液体发酵培养基的制备：液体发酵培养基包括质量百分比为0.3％的牛肉膏、1％的蛋白胨、0.5％的NaCl、1％的红糖、其余为自来水，pH值自然，混合，备用；

步骤(2)，液态种子液的制备：将解淀粉芽孢杆菌斜面接入到装有液体发酵培养基的组培瓶中，在30℃、120r/min条件下，摇床培养3d，获得液态种子液，备用；

步骤(3)，固态发酵培养基的制备：固态发酵培养基包括麸皮、原油及无机盐溶液；按照无机盐溶液∶麸皮∶原油为50～80mL∶90～110g∶1.5～2.5g的比例，先将麸皮与原油搅拌均匀，再加无机盐溶液，继续混合均匀，121℃条件下灭菌30min，备用；