[发明专利]解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种及其固态菌剂的制备与应用

权利要求书

1.一株芽孢杆菌，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM 2015740，命名为解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种(Bacillusamyloliquefacienssubsp. amyloliquefaciens)6-2c。

2.根据权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c，其特征在于，所述解淀 粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c的16SrDNA序列如SEQIDNo.1所示。

3.一种芽孢细菌制剂，其特征在于，以解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c为活性成分。

4.根据权利要求3所述的芽孢细菌制剂，其特征在于，所述芽孢细菌制剂为固态细 菌制剂。

5.一种根据权利要求3所述的芽孢细菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步 骤：

步骤(1)，液体发酵培养基的制备：液体发酵培养基包括质量百分比为0.3％的牛肉膏、 1％的蛋白胨、0.5％的NaCl、1％的红糖、其余为自来水，pH值自然，混合，备用；

步骤(2)，液态种子液的制备：将解淀粉芽孢杆菌斜面接入到装有液体发酵培养基的 组培瓶中，在30℃、120r/min条件下，摇床培养3d，获得液态种子液，备用；

步骤(3)，固态发酵培养基的制备：固态发酵培养基包括麸皮、原油及无机盐溶液； 按照无机盐溶液∶麸皮∶原油为50～80mL∶90～110g∶1.5～2.5g的比例，先将麸皮与原 油搅拌均匀，再加无机盐溶液，继续混合均匀，121℃条件下灭菌30min，备用；

步骤(4)，固态细菌制剂的制备：取步骤(2)的液态种子液转接到步骤(3)的固态 发酵培养基中，其中，液态种子液与固态发酵培养基的比例为3mL∶5g，再在28～30℃条 件下恒温静置培养5～6d；培养结束后，将培养物取出，40℃烘干，粉碎，过0.10mm筛， 即得固态芽孢细菌制剂。

6.根据权利要求5所述的芽孢细菌制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，解 淀粉芽孢杆菌斜面的培养方法为：将解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种6-2c接种到牛肉膏蛋白 胨琼脂斜面培养基中，28～30℃培养48h，即得。

7.根据权利要求5所述的芽孢细菌制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所 述无机盐溶液包括以下质量分数的成分：0.2％NaNO₃，0.1％(NH₄)₂SO₄，0.03％MgSO₄·7H₂O， 0.5％KH₂PO₄，1％K₂HPO₄·3H₂O，0.5％NaCl，其余为自来水，pH值自然。

8.权利要求3或4所述的芽孢细菌制剂在原油或固体石蜡降解中的应用。

9.根据权利要求8所述的芽孢细菌制剂在原油或固体石蜡降解中的应用，其特征在 于，使用方法如下：按质量比1∶30的比例将固态芽孢细菌制剂加入到30～35℃的自来水 中，振荡0.5h，玻璃棉过滤，所得滤液即为固态芽孢细菌制剂稀释菌悬液；将该菌悬液与 原油或固态石蜡按质量比15∶1混合均匀，40℃反应96h，每3～5h摇动一次。

10.根据权利要求8所述的芽孢细菌制剂在原油或固体石蜡降解中的应用，其特征在 于，使用方法如下：按质量比1∶30的比例将固态芽孢细菌制剂加入到30～35℃的自来水 中，混合、搅拌、过滤，所得滤液即为供试固态细菌菌剂稀释菌悬液；将该稀释菌悬液与 水按1∶100～200混合均匀注入油井，以降解井壁凝结的固态石蜡；或将该稀释菌悬液与 水按1∶200～500混合均匀注入油层，以降解原油。