[发明专利]一种小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法，属于生物提取技术领域。

背景技术：

蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。可以说，没有蛋白质就没有生命。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

蛋白质的结构可以分为四级：一级结构是氨基酸的线性排列顺序；二级结构是一级结构中部分肽链的弯曲或折叠；三级结构是在二级结构基础上进一步折叠成紧密的三维形式；四级结构是由蛋白质亚基结构形成的多于一条多肽链的蛋白质分子的空间排列。大分子蛋白可能比小分子蛋白多几条肽链或者在结构上更为复杂，因此大分子蛋白在吸收上比小分子要困难很多，只有当其经过多级消化变为氨基酸之后才能便于被吸收，吸收效率低，身体缺少某些蛋白酶或对蛋白质过敏的人群很难有效吸收到，尤其是医药中使用的用于身体表面的蛋白，必须要分解为小分子肽才能被人体有效吸收。

经过多年来的研究，生物界形成共识，分子量小于1000道尔顿的小分子肽，无论透皮吸收还是口服，都有特殊功能，不同于其它分子量大一些的肽。因此，小分子蛋白肽的研究十分重要。

丝素蛋白是一种从蚕丝中提取的蛋白质，具有很好的生物相容性，能制备成膜、凝胶、微胶囊等多种形态的材料，由于它独特的理化性能，目前丝素蛋白材料在生物医学材料领域被广泛的研究，如固定化酶材料、细胞培养基质、药物缓释剂、人工器官等等。

蚕丝丝素蛋白肽含有十七种氨基酸，其中人体所需的氨基酸几乎具备，特别是人体皮肤、毛发十分需要的营养氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、酪氨酸)其含量占到氨基酸总量的80％以上，这是其他水解蛋白所不可及的。蚕丝丝素蛋白肽是由天然蚕丝经特殊工艺提取而成，因此，氨基酸组成与含量是衡量产品质量的重要指标之一；而蚕丝丝素蛋白肽分子量的大小与护肤功效的发挥又有着密切的联系。尤其是小分子的蚕丝丝素蛋白肽，作用十分显著。

但是，目前在纯度高的、分子量小于1000道尔顿的小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法研究上，鲜有成果。

发明内容：

本发明克服了上述技术的不足提供了一种纯度99％以上、分子量小于1000道尔顿的小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明的小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法包含以下步骤：

(1)去蛹：选取优质的桑蚕丝茧，煮沸，切开将死蛹剥除；

(2)风选：用风扇吹，控制风力，将密度比茧轻的杂物吹走；

(3)粉碎：用粉碎机械将去蛹的茧粉碎为直径5mm以下的茧片；

(4)脱胶：将茧片置于0.7～1％的弱碱溶液中煮沸35～40min，并同时用强力搅拌设备搅拌，取出茧片用水漂洗几次，烘干；

(5)水解：将茧片置于盛放浓度为1～1.3％的KCl和/或MgCl₂水溶液的密闭容器中升温，在0.5～0.6Mpa、130～140℃的条件下使蚕丝丝素蛋白溶解；

(6)过滤：对混合物进行过滤，得到未溶部分的胶状固态物和滤液；

(7)透析：将滤液置于透析袋中用水透析纯化，以除去KCl和/或MgCl₂以及其它小分子杂质，从而制得蚕丝丝素蛋白溶液；

(8)酶解：将未溶部分的胶状固态物用清洁水冲净，与上一步骤制得的蚕丝丝素蛋白溶液混合，加入总重量1.2～2％的蛋白酶进行酶解，PH值为6～7，温度32～37℃，时间7～10h；

(9)灭酶：酶解结束后升温到70～80℃，保温20～30min灭酶，得到纯度大于90％、相对分子质量小于1000道尔顿的小分子蚕丝丝素蛋白肽溶液；

(10)纳滤：用相对分子质量为1000道尔顿的纳滤膜去除掉大分子蚕丝丝素蛋白肽，得到纯度大于99％的小分子蚕丝丝素蛋白肽溶液；

(11)干燥：利用喷雾干燥快速干燥，得到小分子蚕丝丝素蛋白肽。

上述的小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法，其中优选方案为：步骤(5)中KCl和/或MgCl₂水溶液的浓度为1.25％。

上述的小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法，其中优选方案为：步骤(5)中压力为0.57Mpa、温度为138℃。

上述的小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法，其中优选方案为：步骤(8)中蛋白酶的种类为木瓜蛋白酶和/或中性蛋白酶。

上述的小分子蚕丝丝素蛋白肽的制备方法，其中优选方案为：步骤(8)中蛋白酶的加入量为总重量1.3％，温度36℃，时间8h.