[发明专利]一种百合定向活体转化液及其转化方法

权利要求书

1.一种百合定向活体转化液，其特征在于，其由农杆菌工程菌液、SilwetL-77、蔗糖、乙酰丁香酮、吐温、蓝莓浸提液组成。

2.根据权利要求1所述的一种百合定向活体转化液，其特征在于，所述的农杆菌工程菌液为自行制备，将保存在-80℃的农杆菌工程菌划线培养于含卡那霉素的YEP培养基中，28℃暗培养2-3天，待菌落长出后挑取单菌落接种于50ml含有卡那霉素和利福平的YEP液体培养基中，于28℃、220r/min振荡培养至对数生长期即可制成农杆菌工程菌液。

3.根据权利要求1所述的一种百合定向活体转化液，其特征在于，所述的蓝莓浸提液为自行制备，将蓝莓与等体积水混合，榨汁，过滤灭菌即可制得蓝莓浸提液。

4.根据权利要求1所述的一种百合定向活体转化液，其特征在于，所述的SilwetL-77的体积浓度为0.03%-0.05%，吐温的体积浓度为0.03%-0.06%，蔗糖的浓度为200-400mg/L，乙酰丁香酮的浓度为18-20mg/L，蓝莓浸提液浓度为2-4ml/L。

5.一种百合定向活体转化方法，其特征在于，其包括以下步骤：

S010转化液的准备：向农杆菌工程菌液加入SilwetL-77、蔗糖、乙酰丁香酮、吐温和蓝莓浸提液、卡那霉素、利福平制成转化液；

S020活体转化：选取刚长出的花芽，控制花芽表层平均温度为20-23℃，向花芽洒上无菌水，保持其湿度为75%-80%，用医用注射器将花芽轻轻刺伤，并注射步骤S010配制的转化液；

S030农杆菌与花芽共培养：用浸泡过转化液的医用棉花覆盖转化后的花芽，并将转化植株置于温度为20-23℃、湿度为75%-80%的温室下培养3-5天；

S040抗性花芽筛选：在共培养结束后向花芽喷洒利福平和卡那霉素，筛选出成功转化并能正常分离分化的抗性花芽，将转化成功植株按常规百合栽培方法进行水肥管理；

S050基因检测：将抗性花芽进行基因检测，检测结果为阳性的即为转基因植株。

6.根据权利要求5所述的一种百合定向活体转化方法，其特征在于，其所述的步骤S010转化液的制备中，在制备转化液前进行步骤S011农杆菌工程菌液基因检测，检测结果为阳性即可继续进行步骤S010转化液的制备。

7.根据权利要求6所述的一种百合定向活体转化方法，其特征在于，其所述的步骤S011农杆菌工程液基因检测方法是PCR鉴定，还可以是GUS染色鉴定。

8.根据权利要求5所述的一种百合定向活体转化方法，其特征在于，其所述的步骤S050基因检测所使用的检测方法是PCR鉴定，还可以是GUS染色鉴定。