[发明专利]一种从十二指肠中提取硫酸乙酰肝素的工艺

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种从十二指肠中提取硫酸乙酰肝素的工艺。

背景技术

硫酸乙酰肝素是动物组织中的一类重要物质。硫酸乙酰肝素在结构上与肝素有一定程度相似, 都属于粘多糖类物质。肝素虽在临床上获得广泛的应用, 但在临床上尚存在较大的副作用如出血等, 使得它的应用受到一定限制。然而,硫酸乙酰肝素在很大程度上克服了肝素应用的副作用, 同时具有类似肝素的抗炎、抗血栓和降血脂等生物作用。因此, 硫酸乙酰肝素是目前粘多糖中较有发展前途的新型生化药物, 如国外商品和是一类含多种粘多糖的混合物,它们都可称为广义的类肝素, 而硫酸乙酰肝素可认为是中的一大组成成分, 国内类似的产品有冠心舒和猪十二指肠类肝素等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从十二指肠中提取硫酸乙酰肝素的工艺，旨在解决目前硫酸乙酰肝素产品质量不可控、制备工艺复杂、化学纯度不高，不能有效提高收率的问题。

本发明是这样实现的，一种从十二指肠中提取硫酸乙酰肝素的工艺，该工艺包括：

步骤一，将十二指肠解冻，去除多余油脂，洗净绞碎，得到肠浆。

步骤二，在搅拌状态下加入三倍量的水，调节温度52-65℃，pH9.5-10.5,加入1%的碱性蛋白酶，酶解8-12小时，得混合料液；

步骤三，将混合料液pH调至7.0，温度升至80-90℃，加热10分钟；

步骤四，将混合料液降温至室温，离心，收集离心液；

步骤五，离心液中加入10%的A98树脂，在60℃水浴中吸附3-5小时；

步骤六，将吸附完的树脂清洗干净，加入3倍量的2.5%的氯化钠溶液，分三次加入，每次搅拌30分钟，洗脱液收集，再加入3倍量的6%的氯化钠溶液，分三次加入，每次搅拌60分钟，洗脱液收集。

步骤七，将收集的6%洗脱液，加入5%的氯化钠，1.2-1.6倍药用乙醇沉淀；

步骤八，将沉淀物溶解为5%的浓度，pH调至10.0-11.0，温度80-90℃，加热30分钟，放置室温，用0.45微米的滤膜过滤，加入3%氯化钠，料液体积的1.2-1.6倍药用乙醇沉淀；

步骤九，将沉淀物溶解为10%的浓度，温度0-5℃，用3mol/L的盐酸将pH调至0.5-2.0，低温离心，收集上清液，加入3%氯化钠，1.2-1.6倍药用乙醇沉淀；

步骤十，将沉淀物溶解为10%的浓度，温度40℃-45℃，pH6.5-7.0，加入10%氯化钠，0.5-0.7倍药用乙醇沉淀；

步骤十一，将沉淀物溶解为10%的浓度，温度40℃-45℃，pH6.5-7.0，加入10%氯化钠，0.9倍药用乙醇沉淀；

步骤十二，将沉淀物溶解为15%的浓度，温度30℃-35℃，pH10.0-10.5，加入1%H₂O_2,氧化10小时，经0.22微米、0.1微米滤膜双重过滤；

步骤十三，将沉淀物溶解为10%的浓度，温度40℃-45℃，pH6.5-7.0，加入2%氯化钠，1.2-1.6倍药用乙醇沉淀；

步骤十四，将沉淀物研磨、真空干燥24小时。

进一步，所述步骤八的碱加热的处理方法为在温度80-90℃，在搅拌状态下将料液pH调节至10.0-11.0，该条件可将蛋白充分水解，有利于硫酸乙酰肝素充分解离，进一步纯化后得到硫酸乙酰肝素。

进一步，所述步骤九的酸处理的处理方法为在温度降至0℃-5℃时，在搅拌状态下将溶液的pH值调节至0.5-2.0，低温酸处理使蛋白变性，将糖链与蛋白进一步分离。

进一步，所述步骤十的低倍沉淀的处理方法为在温度40℃-45℃，pH6.5-7.0，加入0.5-0.7倍药用乙醇沉淀，可有效地去除杂质制得硫酸乙酰肝素。

进一步，所述从十二指肠中提取硫酸乙酰肝素的工艺经绞碎 、生物酶解、树脂吸附、 洗脱、碱加热、酸处理、低倍沉淀、氧化、沉淀步骤，制得符合规定的硫酸乙酰肝素。

本发明提供的积极效果：本发明的产品质量可控、制备工艺先进、化学纯度高，能有效提高收率；本发明方法工艺易于操作，生产成本低，产品稳定性高，适合大规模生产。

附图说明

图1是本发明实施例提供的从十二指肠中提取硫酸乙酰肝素的工艺流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。