[发明专利]基于眼镜蛇毒PIII型金属蛋白酶的抗凝血药及其应用

权利要求书

1.基于眼镜蛇毒PIII型金属蛋白酶在制备抗凝血药中的应用，所述蛋白酶是从中华眼镜蛇又称舟山种眼镜蛇，分类名：Naja atra中分离纯化获得；所述蛋白酶是单链糖蛋白，结构解析表明具有3个结构域：金属蛋白酶结构域、去整合素样结构域、富含半胱氨酸结构域，属于PIII型蛇毒金属蛋白酶；

所述基于眼镜蛇毒PIII型金属蛋白酶，其名称分别为Atrase A和Atrase B，其中Atrase A推导分子量为46717.14，等电点为7.281；Atrase B推导分子量为44749.39，等电点为7.238；两序列的核苷酸相似度为85.9％，氨基酸相似度为65.4％，其序列为：AtraseA：SEQIDNo.1；AtraseB：SEQIDNo.2；

所述基于眼镜蛇毒PIII型金属蛋白酶具有水解纤维蛋白原α链的活性，该活性能被金属螯合剂EDTA、EGTA、1，10-phenanthroline和还原剂DTT完全抑制；目标蛋白Atrase A和Atrase B的实际分子量分别为51.5kDa和49.4kDa，但依据不同的测定方法其表观分子量有所不同：Atrase A在还原性和非还原性SDS-PAGE中分别为64.6和57.1kDa，凝胶过滤方法测定为56.5kDa；Atrase B在还原性和非还原性SDS-PAGE中分别为62.2和55.8kDa，凝胶过滤方法测定为54.3kDa，范围在45kDa-65kDa之间；等点聚焦的测定结果表明，变性条件下目标蛋白Atrase A和Atrase B的等电点分别为9.6和9.7，目标蛋白没有水解酪蛋白活性，也没有精氨酸酯酶活性和纤维蛋白水解活性；目标蛋白含有糖基，其中性糖含量为5％；

所述抗凝血药冻干粉针剂复溶后由下述组分组成：pH为7.4的0.01M磷酸钠缓冲液0.5ml中含有基于眼镜蛇毒PIII型金属蛋白酶纯化样品0.1mg或0.4mg、质量分数为0.9％的氯化钠、质量分数为2％的甘露醇、质量分数为2％的海藻糖、质量分数为0.15％的精氨酸、质量分数为0.01％的吐温80。