[发明专利]用于将非多能细胞重编程为多能干细胞的改进方法

权利要求书

1.一种用于诱导非多能真核细胞中的多能性的试剂盒或细胞培养基组合物，所述组合物包含选自以下组中的每一种中的多能性化学诱导剂(CIP)：

(1)糖原合成酶激酶(GSK)抑制剂，

(2)TGFβ受体抑制剂，

(3)环AMP(cAMP)激动剂，

(4)S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAH)抑制剂，

(5)组蛋白乙酰化剂，

(6)DOT1L甲基转移酶抑制剂，

(7)视黄酸受体(RAR)激动剂，

(8)表观遗传调节剂，和

(9)组蛋白去甲基化抑制剂，

其中所述GSK抑制剂是[6-[[2-[[4-(2,4-二氯苯基)-5-(5-甲基-1H-咪唑-2-基)-2-嘧啶基]氨基]乙基]氨基]-3-吡啶腈](“C”)；所述TGFβ受体抑制剂是[2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,5-萘啶](“6”)；所述cAMP激动剂是毛喉素(“F”)，所述SAH抑制剂是3-脱氮瓶菌素A(“Z”)，所述DOT1L甲基转移酶抑制剂是SGC 0946(“S”)(1-[3-[[[(2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-5-溴-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲基](异丙基)氨基]丙基]-3-[4-(2,2-二甲基乙基)苯基]脲)或EPZ004777，“1-(3-((((2R,3S,4R,5R)-5-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲基)(异丙基)氨基)丙基)-3-(4-(叔丁基)苯基)脲(“E”)；RAR激动剂包括AM 580(“A”)(4-[(5，6，7，8-四氢-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)甲酰胺基]苯甲酸)；所述表观遗传调节剂是5-氮杂胞苷(“D”)并且所述组蛋白去甲基化抑制剂是反苯环丙胺(“T”)，所述组蛋白乙酰化剂是丙戊酸(“V”)，所述组合物包含VC6TFZASD，

其中所述多能性化学诱导剂的量有效诱导XEN样细胞重编程为多能干细胞，其中所述XEN样细胞是指被表征为上皮细胞、并且表达XEN标记SALL4、GATA4和SOX17的细胞。

2.权利要求1所述的试剂盒或细胞培养基组合物，所述组合物包含2i培养基，其中所述2i培养基是包含6-[[2-[[4-(2,4-二氯苯基)-5-(5-甲基-1H-咪唑-2-基)-2-嘧啶基]氨基]乙基]氨基]-3-吡啶腈(CHIR99021)和PD0325901的ESC培养基。

3.权利要求1或2所述的试剂盒或细胞培养基组合物，所述组合物还包含选自由前列腺素E2(PGE2)和咯利普兰组成的组的小分子。

4.权利要求1或2所述的试剂盒或细胞培养基组合物，所述组合物还包含提高/增加化学重编程效率的小分子，所述小分子选自由下列组成的组：SF1670[N-(9,10-二氧代-9,10-二氢菲-2-基)棕榈酰胺]；DY131[N-(4-(二乙基氨基亚苄基)-N’-(4-羟基苯甲酰基)-肼]；UNC0638[2-环己基-6-甲氧基-N-[1-(1-甲基乙基)-4-哌啶基]-7-[3-(1-吡咯烷基)丙氧基]-4-喹唑啉胺]；SRT1720[N-(2-(3-(哌嗪-1-基甲基)咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)苯基)喹喔啉-2-羧酰胺盐酸盐]；2-Me-5HT(2-甲基-5-羟色胺)；IBMX[3,7-二氢-1-甲基-3-(2-甲基丙基)-1H-嘌呤-2,6-二酮]；和(4-[4-(2,3-二氢-1,4-苯并二英-6-基)-5-(2-吡啶基)-1H-咪唑-2-基]苯甲酰胺)和TTNPB[4-[(E)-2-(5,6,7,8-四氢-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)-1-丙烯基]苯甲酸]。

5.权利要求1或2所述的试剂盒或细胞培养基组合物，所述组合物还包含N2B27。

6.权利要求1或2所述的试剂盒或细胞培养基组合物，所述组合物包含蛋白生长因子。