[发明专利]葡糖淀粉酶共混物

说明书

提供了用于糖化淀粉底物的方法，所述方法包括使该淀粉底物与葡糖淀粉酶接触，该葡糖淀粉酶包括轮枝镰孢菌葡糖淀粉酶(Fv‑GA)的氨基酸序列或由其组成，并且进一步使该淀粉底物与至少一种另外的葡糖淀粉酶接触。提供了使用Fv‑GA和至少一种另外的葡糖淀粉酶的组合来糖化和发酵淀粉底物，以产生终产物、生物化学终产物和发酵饮料的另外的方法。

序列表

还附上包含SEQ ID NO:1-12的序列表并且将这些序列表以其全文通过引用结合在此。

技术领域

本披露总体上涉及葡糖淀粉酶(GA)，并且还描述了在与生产糖、糖浆、和生物化学品(包括乙醇)相关的工艺中使用这些GA(特别是在共混物中)的方法。

背景技术

工业发酵主要使用葡萄糖作为用于生产大量蛋白质、酶、醇和其他化学终产物的原料。典型地，葡萄糖是淀粉加工的产物，该淀粉加工常规是催化淀粉分解的两步酶工艺，涉及液化和糖化。

在液化期间，将不溶性颗粒状淀粉在水中成浆，进行加热凝胶化，并通过热稳定的α-淀粉酶进行水解。在糖化期间，在液化中产生的可溶性糊精被葡糖淀粉酶进一步水解，产生包含高于95％葡萄糖的高葡萄糖浆。

葡糖淀粉酶是外切作用糖酶，能够水解淀粉(例如，直链淀粉和支链淀粉)的直链和支链糖苷键，从而自淀粉(例如，酶-液化淀粉底物)产生可发酵糖。这些可发酵糖，例如，低分子量的糖(如葡萄糖)然后可以通过其他酶(例如，葡萄糖异构酶)被转化为果糖；进行结晶；或在发酵中使用以产生许多终产物(例如，醇、谷氨酸一钠、琥珀酸、维生素、氨基酸、1,3-丙二醇、以及乳酸)。

鉴于葡糖淀粉酶在从淀粉产生葡萄糖中发挥的核心作用，在本领域中提供用于这一转化的具有改进特性的葡糖淀粉酶(GA)的新共混物将是有利的。GA共混物的改进特性的实例包括但不限于：生产糖、糖浆、和生物化学品(包括但不限于乙醇)。

发明内容

提供了用于糖化淀粉底物的方法，所述方法包括使该淀粉底物与葡糖淀粉酶接触，该葡糖淀粉酶包括轮枝镰孢菌葡糖淀粉酶(Fv-GA)的氨基酸序列或由其组成，并且进一步使该淀粉底物与至少一种另外的葡糖淀粉酶接触。提供了使用Fv-GA和至少一种另外的葡糖淀粉酶的组合来糖化和发酵淀粉底物，以产生终产物、生物化学终产物和发酵饮料的另外的方法。

本发明的实施例包括：

1.一种用于糖化淀粉底物的方法，该方法包括使该淀粉底物与葡糖淀粉酶接触，该葡糖淀粉酶由Fv-GA(SEQ ID NO:1)的序列组成，该葡糖淀粉酶与Fv-GA(SEQ ID NO:1)的序列具有至少85％同一性，与Fv-GA(SEQ ID NO:1)的催化结构域具有至少85％同一性，与接头和Fv-GA(SEQ ID NO:1)的催化结构域具有至少85％同一性，或与具有葡糖淀粉酶活性的Fv-GA(SEQ ID NO:1)的活性片段具有至少85％同一性，并且使该淀粉底物与至少一种另外的葡糖淀粉酶接触。

在方法1的一些实施例中，第一个列出的葡糖淀粉酶与Fv-GA(SEQ ID NO:1)的序列具有90％、95％、98％、或99％同一性。

2.如1中所述的方法，其中该另外的葡糖淀粉酶包括Afu-GA(SEQ ID NO:3)或An-GA(SEQ ID NO:7)。

3.如1或2所述的方法，其中该另外的葡糖淀粉酶是Afu-GA(SEQ ID NO:3)或是与SEQ ID NO:3具有至少85％同一性的葡糖淀粉酶。

4.如1或2所述的方法，其中该另外的葡糖淀粉酶是An-GA(SEQ ID NO:7)或是与SEQ ID NO:7具有至少85％同一性的葡糖淀粉酶。

5.如1-4中任一项所述的方法，其中糖化该淀粉底物导致高葡萄糖浆。