[发明专利]在体外培养分节丝状菌的方法

权利要求书

1.一种培养分节丝状菌(SFB)菌株的体外方法，其包括将宿主细胞与所述SFB菌株共培养，所述宿主细胞是人或小鼠结肠上皮细胞或小肠细胞，或人或小鼠腺癌细胞，其中在丰富的组织培养液体培养基中，在低于5％的O₂水平下进行培养，所述丰富的组织培养液体培养基含有包括浓度为0.015至0.05mM的铁的细菌培养基组分。

2.一种培养SFB菌株的体外方法，其包括以下步骤：

a)在固体培养基上生长宿主细胞，所述宿主细胞是人或小鼠结肠上皮细胞或小肠细胞，或人或小鼠腺癌细胞；

b)将在步骤a)中生长的宿主细胞浸入丰富的组织培养液体培养基中，所述丰富的组织培养液体培养基含有包括浓度为0.015至0.05mM的铁的细菌培养基组分；

c)用SFB菌株攻击步骤b)的细胞培养物；

d)在液体培养基中，在低于5％的O₂水平下，共培养活的宿主细胞和SFB菌株；和任选地

e)回收培养的SFB菌株。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中SFB菌株是野生型菌株或通过转化、转导或缀合从野生型SFB菌株获得的遗传修饰菌株。

4.根据权利要求3所述的方法，其中野生型SFB菌株从哺乳动物分离。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中宿主细胞选自人Caco-2、TC7或HeLa细胞系或小鼠mICcl2或CMT93细胞系。

6.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤a)中，宿主细胞在0.5至3％的O₂水平生长。

7.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤a)中，用于生长宿主细胞的温度是36℃至38℃。

8.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤a)中，使宿主细胞生长直到细胞汇合度至少为20％、25％、30％、35％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％。

9.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤a)中，使宿主细胞生长直到获得细胞单层。

10.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤a)中，宿主细胞的接种密度在每平方厘米1×10⁴至6×10⁴个细胞。

11.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤b)中，宿主细胞-SFB液体培养基是含有包括铁的细菌培养基组分的丰富的组织培养基。

12.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤b)中，宿主细胞-SFB液体培养基包含脑心浸液和酵母/蛋白胨/酪蛋白氨基酸混合物。

13.根据权利要求1或2所述的方法，其中液体培养基包含DMEM/F12改进培养基，所述DMEM/F12改进培养基补充有胎牛血清、非必需氨基酸、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸、脑心浸液、酵母/蛋白胨/酪蛋白氨基酸混合物和铁。

14.根据权利要求1或2所述的方法，其中在步骤b)中，SFB菌株是细丝或细胞内后代的形式。

15.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤c)中，SFB菌株与宿主细胞紧密接触或直接接触。

16.根据权利要求2所述的方法，其中在步骤c)中，宿主细胞的培养密度在每平方厘米0.5×10⁵至3×10⁵个细胞。