[发明专利]通过使用由靶材料调节的核酸聚合酶的活性用于检测和量化生物材料的方法

权利要求书

1.一种使用由靶核酸控制的核酸聚合酶活性以关闭模式检测或量化所述靶核酸的方法，其包括：

(a)添加核酸聚合酶至包含适体和检测样品的混合物，并使所述核酸聚合酶与所述混合物反应以由此使核酸聚合酶与适体-靶核酸复合物结合，所述适体在其5’末端或3’末端具有SEQ ID NO: 21所示的保守区并且包含特异性识别所述靶核酸的单链核酸，且所述检测样品推测可能包含所述靶核酸，

(b)将包含引物、模板核酸和信号生成物质的混合物与步骤(a)的反应产物混合，随后进行引物延伸反应；和

(c)分析步骤(b)的引物延伸反应以由此检测或量化所述靶核酸，

其中当与所述靶核酸结合时所述适体形成稳定的结构，且随后与所述核酸聚合酶结合以降低所述聚合酶的活性。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述适体的单链具有与所述靶核酸互补的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述适体具有选自下组的核苷酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9和SEQ IDNO: 12。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶核酸选自下组：SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11和SEQ ID NO: 13。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸聚合酶是Taq DNA聚合酶。

6.根据权利要求1所述的方法，其中将步骤(a)的混合物在90°C加热5分钟，且随后缓慢冷却至25°C，随后向其添加所述核酸聚合酶并进行反应。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述信号生成物质包含TaqMan探针。

8.根据权利要求1或7所述的方法，其中将步骤(b)中使用的包含所述信号生成物质的混合物在90°加热5分钟，且随后缓慢冷却至25°C，随后使其进行反应，所述反应使所述引物和TaqMan探针与模板核酸结合，且随后与步骤(a)的反应产物混合。

9.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(c)包括检测或量化源自步骤(b)的引物延伸反应的信号以由此确定所述靶核酸的存在或不存在。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述引物延伸反应在20-30°C的温度实施。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述信号生成物质用选自下组的物质标记：放射性同位素、荧光物质、染料、纳米颗粒、酶、酶底物和包含电化学官能团的物质。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述信号生成物质用选自以下的物质标记：发光物质。

13.一种使用由靶核酸控制的核酸聚合酶活性以开启模式检测或量化靶分子的方法，其包括：

(a)添加核酸聚合酶和推测可能包含所述靶分子的检测样品至包含阻断剂核酸和适体的混合物，并使所述核酸聚合酶和所述检测样品与所述混合物反应以由此使所述核酸聚合酶与适体-阻断剂核酸复合物结合，所述阻断剂核酸具有特异性识别并结合所述靶分子的核苷酸序列，所述适体在其5’末端或3’末端具有SEQ ID NO: 21所示的保守区并且包含与所述阻断剂核酸互补的单链核酸；

(b)将包含引物、模板核酸和信号生成物质的混合物与步骤(a)的反应产物混合，随后进行引物延伸反应；和

(c)分析步骤(b)的引物延伸反应以由此检测或量化所述靶分子，

其中当与所述阻断剂核酸结合时所述适体形成稳定的结构，且随后与所述核酸聚合酶结合以降低所述聚合酶的活性。