[发明专利]键形成酶的活性测定

权利要求书

1.用于检测样品中键形成酶的方法，其包括以下步骤：

a)将样品与包含固定标签的第一底物和包含可检测标记的第二底物孵育，由此在样品中键形成酶的存在下，形成包含固定标签和可检测标记的缀合物，

b)离心样品，

c)通过固定标签将步骤a)的缀合物固定至固相，

d)通过可检测标记检测固定的缀合物，

从而检测样品中的键形成酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤a)的孵育之后，另外地将样品稀释10倍至30倍。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中包含固定标签的第一底物包含第一键形成酶识别基序，并且包含可检测标记的第二底物包含第二键形成酶识别基序。

4.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中第一键形成酶识别基序是第一分选酶识别基序，第二键形成酶识别基序是第二分选酶识别基序。

5.根据权利要求4所述的方法，其中

1)第一分选酶识别基序包含LPXTG基序(SEQ ID NO：01)，其中X表示任何氨基酸，第二分选酶识别基序包含寡聚甘氨酸或寡聚丙氨酸基序或

2)第二分选酶识别基序包含LPXTG基序(SEQ ID NO：01)，其中X表示任何氨基酸，第一分选酶识别基序包含寡聚甘氨酸或寡聚丙氨酸基序。

6.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中可检测标记是酶。

7.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中固定标签是特异性结合对的第一成员，并且固相与特异性结合对的第二成员缀合。

8.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中固定标签是生物素，并且固相与链霉亲和素或抗生物素蛋白缀合。

9.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中固相是多孔板。

10.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中固相是珠。

11.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中在步骤a)的孵育之后，用包含碘乙酰胺(IAA)的溶液稀释样品。

12.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中样品在2500×g至7500×g之间离心5分钟至15分钟。

13.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中在步骤c)的固定之后，另外地将样品洗涤至少3次。

14.用于从多种键形成酶中选择键形成酶的方法，其通过

a)提供至少两种键形成酶，

b)用所述至少两种键形成酶进行权利要求1的方法，

c)选择步骤b)中检测的键形成酶。

15.根据权利要求14所述的方法，其中选择具有最高活性的键形成酶。

16.根据权利要求1至2或14中任一项所述的方法，其中所述键形成酶是分选酶。