[发明专利]用于多重捕获反应的通用阻断寡聚物系统和改进的杂交捕获的方法

权利要求书

1.一种用于大规模并行核酸测序的组合物，其包含：

a)包含多个文库插入物的单链核酸的文库，其中所述文库的每个单链核酸包含(i)从四个或更多个样品之一获得的至少一个文库插入物，(ii)第一非天然核酸，和(iii)第二非天然核酸，其中所述第一非天然核酸和所述第二非天然核酸位于所述至少一个文库插入物的相对侧上，并且所述第一非天然核酸包含第一可区分核酸条形码，所述第二非天然核酸包含第二可区分核酸条形码，其中所述第一和第二可区分核酸条形码对于所述四个或更多个样品之一是独特的；和

b)四个单链通用阻断(U阻断)核酸，其中(i)第一和第二U阻断核酸配置为与所述第一可区分核酸条形码的相对侧上的所述第一非天然核酸杂交，(ii)第三和第四U阻断核酸配置为与所述第二可区分核酸条形码的相对侧上的所述第二非天然核酸杂交，(iii)所述单链U阻断核酸各自基本上不与所述第一或第二可区分核酸条形码的部分杂交，和(iv)所述四个单链U阻断核酸各自包含10至40个核苷酸的长度和至少65℃的熔融温度。

2.权利要求1所述的组合物，其中所述核酸的文库包含至少八个可区分核酸条形码，并且任选地，其中所述至少八个可区分核酸条形码各自存在于所述文库的不同核酸上。

3.权利要求1或2所述的组合物，其中所述第一和第二U阻断核酸与所述第一非天然核酸的部分基本上互补，并且所述第三和第四U阻断核酸与所述第二非天然核酸的部分基本上互补。

4.权利要求1至3中任一项所述的组合物，其包含不超过四个U阻断核酸。

5.权利要求1至4中任一项所述的组合物，其包含一个或多个捕获核酸，其中

(i)所述捕获核酸包含结合对的成员；和

(ii)所述捕获核酸各自配置为与所述文库的核酸的亚组特异性杂交。

6.权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述核酸的文库包含十个或更多个可区分核酸条形码。

7.权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述第一和第二非天然核酸包含衔接子核酸。

8.权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述四个U阻断核酸各自包含10至30个核苷酸的长度。

9.权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述四个U阻断核酸各自包含锁核酸。

10.权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述四个U阻断核酸各自包含桥连核酸。

11.权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述四个U阻断核酸各自包含65℃至90℃的熔融温度。

12.权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述四个U阻断核酸基本上不与可区分核酸条形码杂交。

13.权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中所述四个U阻断核酸包含链终止子。