[发明专利]能够中和具有替换凝固因子VIII(FVIII)的功能的活性的物质的抗体

说明书

本发明的发明人尝试制备中和具有在功能上替换FVIII的活性的物质的活性的抗体，所述抗体用于在具有在功能上替换FVIII的活性的物质存在下测量FVIII的反应性的方法。结果，发明人发现通过使用所制备的抗体，通过基于APTT的一步凝固测定可以准确地评估血友病A患者的血浆中的FVIII活性，并且还发现可以通过基于APTT的Bethesda测定准确地评估携带FVIII抑制剂的血友病A患者的血浆中的FVIII抑制剂滴度。

技术领域

本发明涉及抗体，所述抗体用于在具有在功能上替换凝固因子VIII(FVIII)的活性的物质存在下测量FVIII的反应性的方法。

背景技术

血友病是由FVIII或凝固因子IX(FIX)的先天性缺陷或功能障碍造成的出血性疾病。前者被称作血友病A，后者被称作血友病B。这两个基因都位于X染色体上；且由于它们是X-染色体-连锁的隐性遗传的遗传异常，发生该疾病的那些人中的99％或更多是男性。已知的是，流行率是10,000个男性出生中的大约1个，且血友病A和血友病B之间的比率是大约5∶1。

血友病患者中的主要出血部位包括关节内、肌肉内、皮下、口内、颅内、消化道、鼻内等。在它们中，重复的关节内出血可以发展成伴有关节障碍和行走困难的血友病性关节病，其最终可能需要关节置换。因此，它是降低血友病患者的生活质量(QOL)的一个主要因素。

血友病的严重程度与血液中的FVIII活性或FIX活性非常相关。具有小于1％的凝固因子活性的患者被归类为严重的，具有1％或更多至小于5％的活性的患者被归类为中等的，且具有5％或更多且小于40％的活性的患者被归类为轻度的。具有严重征状的患者(占血友病患者的大约一半)一个月几次地表现出出血征状(如果他们不接受以后描述的预防性替代疗法)，并且该频率与中等症状的患者和轻度症状的患者的频率相比明显更高。

除了血友病和获得性血友病以外，已知由von Willebrand因子(vWF)的功能异常或缺乏造成的血管性血友病(von Willebrand's disease)是一种有关的出血异常。vWF不仅是血小板在血管壁的损伤部位处发生向内皮下组织的正常粘附所必需的，而且它也是与FVIII形成复合物并将血液中的FVIII保持在正常水平所必需的。在血管性血友病患者中，这些功能下降，从而导致止血功能障碍。

为了预防和/或治疗血友病患者中的出血，主要使用从血浆纯化的血液凝固因子或通过基因工程技术产生的那些。在严重的血友病患者中，认为通过FVIII或FIX替代疗法将血液中的FVIII活性或FIX活性维持在1％或更多对于预防出血征状的出现而言是有效的(非专利文献1、2)。另一方面，在血友病患者、特别是严重的血友病患者中，可能产生针对FVIII或FIX的抗体，其被称作抑制剂。当产生这样的抑制剂时，凝固因子制剂的效应被抑制剂阻断。所以，进行使用大量凝固因子制剂的中和治疗，或使用复杂浓缩物或活化的凝固因子VII制剂(FVIIa制剂)的旁路治疗。

血友病A中FVIII活性的测量主要通过基于激活部分促凝血酶原激酶时间(APTT)的一步凝固测定(非专利文献3)和产色测定(它是使用纯化的凝固因子重构的系统)(非专利文献4)进行。

血友病A中FVIII抑制剂滴度的测量主要通过Bethesda测定或Nijmegen Bethesda测定(非专利文献5、6)进行。