[发明专利]体外胆汁排泄测定法

权利要求书

1.一种表征化学实体的胆汁排泄的体外方法，其包括：

a)提供包含形成至少一个胆小管的肝细胞的细胞培养物；

b)使所述细胞培养物与第一化学实体接触足以允许由所述培养物中的肝细胞摄取所述化学实体的时间；

c)在不裂解所述肝细胞的情况下破坏所述至少一个胆小管，并且检测由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量(如果有的话)；并且

d)裂解所述肝细胞，并检测由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。

2.权利要求1的方法，其中所述细胞培养物是包含布置在固体基底的表面上的肝细胞和基质细胞的肝细胞-基质细胞共培养物。

3.权利要求1的方法，其中在步骤c)中由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量高于在步骤d)中由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。

4.权利要求1的方法，其中在步骤c)中由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量低于在步骤d)中由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。

5.权利要求1的方法，其中使用LC-MS/MS检测步骤c)和/或d)中第一化学实体和/或其代谢物的量。

6.权利要求1的方法，其中所述第一化学实体不包含标记物。

7.权利要求1的方法，其中通过在包含拉春库林A(LatA)和/或不包含钙的培养基中温育所述培养物而在不裂解所述培养物中的肝细胞的情况下破坏所述至少一个胆小管。

8.权利要求1的方法，其还包括在所述细胞培养物中对所述第一化学实体测定内在胆汁清除(CL_胆汁)和/或胆汁排泄指数(BEI)。

9.权利要求8的方法，其还包括将所述第一化学实体的CL_胆汁和/或BEI与对照化学实体的CL_胆汁和/或BEI比较，并且基于所述比较来表征所述第一化学实体的胆汁排泄。

10.权利要求1的方法，其中在所述肝细胞中抑制至少一种肝细胞转运蛋白的活性。

11.权利要求1的方法，其还包括在步骤b)中使所述细胞培养物与第二化学实体接触。

12.权利要求11的方法，其还包括在步骤c)中检测由所述至少一个胆小管释放的所述第二化学实体和/或其代谢物的量。

13.权利要求12的方法，其还包括在步骤d)中检测由所述肝细胞释放的所述第二化学实体和/或其代谢物的量。

14.一种表征化学实体的胆汁排泄的体外方法，其包括：

a)提供包含形成至少一个胆小管的肝细胞的第一细胞培养物，其中在所述第一细胞培养物的所述肝细胞中抑制至少一种肝细胞转运蛋白的活性；

b)使所述第一细胞培养物与第一化学实体接触；

c)在不裂解所述第一细胞培养物中的所述肝细胞的情况下破坏所述第一细胞培养物中的至少一个胆小管，并且检测由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量(如果有的话)；

d)裂解所述第一细胞培养物中的肝细胞，并检测由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量；

e)提供包含形成至少一个胆小管的肝细胞的第二细胞培养物，其中在所述第二细胞培养物的所述肝细胞中不抑制所述至少一种肝细胞转运蛋白的活性；

f)使所述第二细胞培养物与所述第一化学实体接触；

g)在不裂解所述第二细胞培养物中的所述肝细胞的情况下破坏所述第二细胞培养物中的至少一个胆小管，并且检测由所述至少一个胆小管释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量(如果有的话)；并且

h)裂解所述第二细胞培养物中的肝细胞，并检测由所述肝细胞释放的所述第一化学实体和/或其代谢物的量。

15.权利要求14的方法，其中所述第一和第二细胞培养物是肝细胞-基质细胞共培养物，其包含布置在固体基底的表面上的肝细胞和基质细胞。