[发明专利]BCR‑ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法及使用该检测方法用于预测BCR‑ABL抑制剂抗性的数据获得方法

权利要求书

1.一种BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，其包括如下步骤：

使用从受试者采集的生物样品，对包括BCR-ABL融合基因中所含有的融合位点和与BCR-ABL抑制剂抗性相关的突变位点的区域进行扩增的步骤，

使用在上述步骤扩增的核酸，对所述与BCR-ABL抑制剂抗性相关的突变位点的基因型进行确定的步骤。

2.根据权利要求1所述的BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，其特征在于，在确定所述基因型的步骤中，对于所述突变位点使用对应于野生型的野生型探针和对应于突变型的突变型探针，计算所述扩增的核酸中所含有的野生型和/或突变型的丰度比。

3.根据权利要求2所述的BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，其特征在于，所述丰度比为：以与所述野生型探针特异性杂交的核酸量和与所述突变型探针特异性杂交的核酸量作为总量，将与所述野生型探针特异性杂交的核酸量相对于该总量的比作为野生型的丰度比，将与所述突变型探针特异性杂交的核酸量相对于该总量的比作为突变型的丰度比。

4.根据权利要求2所述的BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，其特征在于，所述丰度比为：将与所述野生型探针特异性杂交的核酸量相对于使用在所述突变位点以外与所述扩增的核酸特异性杂交的探针测定的核酸量的比作为野生型的丰度比，将与所述突变型探针特异性杂交的核酸量相对于使用与在所述突变位点以外与所述扩增的核酸特异性杂交的探针测定的核酸量的比作为突变型的丰度比。

5.根据权利要求3或4所述的BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，其特征在于，在所述扩增的步骤中，使用具有荧光标记的引物进行核酸扩增反应，将与所述野生型探针特异性杂交的核酸量、与所述突变型探针特异性杂交的核酸量和所述扩增的核酸量表示为基于荧光强度的绝对值的值。

6.根据权利要求1所述的BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，其特征在于，所述突变位点对应于所述BCR-ABL融合基因所编码的蛋白中的BCR-ABL激酶结构域。

7.根据权利要求1所述的BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，其特征在于，所述突变位点对应于BCR-ABL激酶结构域的315位苏氨酸(野生型)至异亮氨酸(突变型)的取代突变位点和该BCR-ABL激酶结构域的253位酪氨酸(野生型)至组氨酸(突变型)的取代突变位点中的任一个或两个。

8.根据权利要求7所述的BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，其特征在于，对于所述BCR-ABL激酶结构域的315位的取代突变位点，使用含有对应于野生型的CTATATCATCACTGAGTTCATG(序列号1)的野生型探针和含有对应于突变型的CTATATCATCATTGAGTTCATG(序列号2)的突变型探针，

对于所述BCR-ABL激酶结构域的253位的取代突变位点，使用含有对应于野生型的GCCAGTACGGGGAGGTGTAC(序列号3)的野生型探针和含有对应于突变型的GCCAGCACGGGGAGGTGTAC(序列号4)的突变型探针。

9.一种用于预测BCR-ABL抑制剂抗性的数据获得方法，其包括如下步骤：通过权利要求1至8中任一项所述的BCR-ABL抑制剂抗性相关突变的检测方法，根据对从受试者采集的生物样品中所含的BCR-ABL融合基因而确定的基因型对所述受试者的BCR-ABL抑制剂抗性进行判定。