[发明专利]糖底物的酶促转磷酸化

权利要求书

1.通过酶促转磷酸化制备一种或多种糖磷酸酯的方法，包括以下步骤：

(i)提供一种或多种糖底物，

(ii)提供一种或多种磷酸供体底物，

(iii)提供α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶，

(iv)将步骤(i)中提供的一种或多种糖底物和步骤(ii)中提供的一种或多种磷酸供体底物与步骤(iii)中提供的α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶在允许转磷酸化的条件下一起温育，

(v)任选地，纯化在步骤(iv)中获得的一种或多种糖磷酸酯。

2.根据权利要求1的方法，其中所述糖底物选自醛糖和酮糖，优选地选自葡萄糖、葡糖胺、N-乙酰葡糖胺、果糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、山梨糖、木糖、阿拉伯糖、木糖醇、阿拉伯糖醇、鼠李糖和N-乙酰神经氨酸和这些糖的磷酸酯，优选这些糖的单磷酸酯。

3.根据权利要求1或2的方法，其中所述一种或多种磷酸供体底物选自α-葡萄糖-1-磷酸酯、葡萄糖-6-磷酸酯、果糖-6-磷酸酯和果糖-1-磷酸酯。

4.根据上述权利要求任一项的方法，其中步骤(ii)中提供的磷酸供体底物或磷酸供体底物之一是α-葡萄糖-1-磷酸酯。

5.根据权利要求4的方法，其中步骤(ii)包括在磷酸酯或一种或多种磷酸酯源的存在下通过蔗糖磷酸化酶或具有蔗糖磷酸化活性的酶将蔗糖经酶促转化为D-果糖和α-D-葡萄糖-1-磷酸酯。

6.根据权利要求5的方法，其中步骤(ii)和步骤(iv)以及任选的步骤(iii)是同时进行，优选在一锅反应中进行。

7.生物催化剂，其具有蔗糖磷酸化酶活性和α-葡萄糖-1-磷酸酶活性和/或包含蔗糖磷酸化酶和α-葡萄糖-1-磷酸酶或由蔗糖磷酸化酶和α-葡萄糖-1-磷酸酶组成。

8.根据权利要求7的生物催化剂在根据权利要求5或6的方法中的用途。

9.根据权利要求1-6任一项的方法，其中步骤(iii)包括通过宿主细胞表达α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶。

10.根据权利要求9的方法，其中所述α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶分别表达为重组融合蛋白，所述重组融合蛋白包含适合于分离所述α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶的标记。

11.α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶用于一种或多种糖底物、特别是醛糖和酮糖的转磷酸化的用途。