[发明专利]DNA的合成

权利要求书

1.一种合成DNA的无细胞方法，包括使DNA模板与至少一种聚合酶在核苷酸的存在下、在促进所述模板通过链置换复制而扩增的条件下接触，以形成反应混合物，其中在扩增过程中连续地或以等份的方式向所述反应混合物供给另外的核苷酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应混合物还包含一种或多种引物。

3.一种用于合成DNA的无细胞方法，包括使DNA模板与至少一种聚合酶在核苷酸和至少一种引物的存在下、在促进所述模板通过链置换复制而扩增的条件下接触，以形成反应混合物，其中在扩增过程中连续地或以等份的方式向所述反应混合物供给另外的核苷酸。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于合成DNA的无细胞方法，其中所述反应混合物还包含一种或多种金属阳离子，且连续地或以等份的方式向所述反应混合物供给另外的金属阳离子。

5.根据权利要求4所述的方法，其中独立地向所述反应混合物供给所述另外的核苷酸和另外的金属阳离子。

6.根据权利要求1或3所述的方法，其中所述DNA模板是环状的，且所述DNA模板的扩增是通过滚环扩增进行。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述DNA模板是封闭的线性DNA。

8.根据权利要求7所述的方法，其中将所述DNA模板在变性条件下孵育，以形成封闭的环状的单链DNA。

9.根据权利要求1或3所述的方法，其中所述DNA模板包含至少一个加工酶靶序列。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述DNA模板包含至少一个重组酶靶序列或原核端粒酶靶序列。

11.根据权利要求9所述的方法，其中以等份的方式向所述反应混合物供给加工酶。

12.根据权利要求1或3所述的方法，其中以多个等份的形式向所述反应混合物供给所述另外的核苷酸。

13.根据权利要求12所述的方法，其中在整个方法过程中，以有规律的间隔，以多个等份的形式供给所述另外的核苷酸。

14.根据权利要求1或3所述的方法，其中在整个方法过程中，至少每30分钟以多个等份的形式供给所述另外的核苷酸。

15.根据权利要求4所述的方法，其中在整个方法过程中，以有规律的间隔，以多个等份的形式供给所述另外的金属阳离子。

16.根据权利要求4所述的方法，其中在整个方法过程中，至少每30分钟以多个等份的形式供给所述另外的金属阳离子。

17.根据权利要求14所述的方法，其中向所述反应混合物供给至少3、4、5、6、7、8、9或10个等份。

18.根据权利要求15或16所述的方法，其中向所述反应混合物供给至少3、4、5、6、7、8、9或10个等份。

19.根据权利要求17所述的方法，其中所述等份通过使用泵由外部来源进料，或者通过使用渗透泵供给至所述反应混合物。

20.根据权利要求18所述的方法，其中所述等份通过使用泵由外部来源进料，或者通过使用渗透泵供给至所述反应混合物。

21.根据权利要求1或3所述的方法，其中所述核苷酸或另外的核苷酸包含生物上无活性的核苷酸。