[发明专利]用于快速并且灵敏地检测热点突变的方法

说明书

快速、灵敏并且特异性地检测IDH1/2和TERT启动子中的突变的方法采用经历频繁并且异常局部化的突变的基因的特定部分的扩增。区分仅一个核苷酸不同并且可以按极低比率存在的序列的能力为这类分析所必需。

技术领域

本发明涉及遗传和生物化学分析的领域。确切地说，其涉及赘生性样品和其组分的分析。

背景技术

恶性神经胶质瘤是成人中最常见的原发性中枢神经系统(CNS)恶性肿瘤，在美国在2012年导致14,000的死亡²。世界卫生组织(World Health Organization，WHO)已确立用于将神经胶质瘤分类成多种亚型并且将其从I定级到IV(指示其恶性程度)的许多组织学和临床准则。弥漫性神经胶质瘤(WHO II-IV级)，其包括星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、少突星形细胞瘤以及成胶质细胞瘤(GBM)³，由于占所有原发性恶性脑肿瘤的80％而具有特定临床重要性。这些肿瘤是弥漫性浸润性的，其使得治愈性手术切除变得不可能。此外，II-III级弥漫性神经胶质瘤也具有进展到更高WHO IV级GBM的能力。GBM在成人中是最常见的恶性脑肿瘤并且具有最差的存活率(中位总存活期12-15个月)⁴。此外，即使在具有一致组织结构的实体中，患者结果可以大致上变化。这通过原发性GBM显现地最好，原发性GBM相较于从更低级发展的继发性GBM重新发生。两种肿瘤在组织学上不可区分，但在基因和临床上这些疾病相异，因为患有继发性GBM的患者的存活率几乎是原发性GBM的两倍⁵。

归因于异质性、侵袭性、反应性薄壁组织以及形态学特征中的不明确性，弥漫性神经胶质瘤的精确诊断尤其具挑战性。这些诊断难题通过见于这些准则的临床用途中的高程度观察者间变化性来反映。在独立地由四名神经病理学家综述的244神经胶质瘤的研究中，一致性低到52％⁶。弥漫性神经胶质瘤的精确诊断对于针对患者的临床决策极其重要。这种诊断确定治疗方案，并且已知特定亚型展示增加的针对特定化学疗法(例如，用于少突神经胶质瘤治疗的丙卡巴肼(procarbazine)、CCNU以及长春新碱(vincristine)的治疗反应。此外，组织亚型指定患者预后。对于对神经胶质瘤患者的更精确诊断、预后以及个人化护理的递送，明确需要客观的肿瘤特异性标记。