[发明专利]修饰型β-半乳糖苷酶

权利要求书

1.一种β-半乳糖苷酶，由在基准β-半乳糖苷酶中选自以下的(1)～(3)中的一个或二个以上的氨基酸为脯氨酸的氨基酸序列构成，所述基准β-半乳糖苷酶由与序列号4表示的氨基酸序列的90％以上相同的氨基酸序列构成：

(1)与序列号4表示的氨基酸序列的166位的赖氨酸相当的氨基酸；

(2)与序列号4表示的氨基酸序列的307位的甘氨酸相当的氨基酸；

(3)与序列号4表示的氨基酸序列的833位的丙氨酸相当的氨基酸。

2.根据权利要求1所述的β-半乳糖苷酶，其与基准β-半乳糖苷酶相比耐热性提高。

3.根据权利要求1或2所述的β-半乳糖苷酶，其中，(1)和(2)、(1)和(3)、或(1)～(3)为置换对象。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的β-半乳糖苷酶，其中，基准β-半乳糖苷酶由序列号4表示的氨基酸序列构成。

5.根据权利要求1所述的β-半乳糖苷酶，由序列号9～15中任一个氨基酸序列构成。

6.一种β-半乳糖苷酶，由在基准β-半乳糖苷酶中选自以下的(1)～(3)中的一个或二个以上的氨基酸为脯氨酸的氨基酸序列构成，所述基准β-半乳糖苷酶由与序列号1～3中任一个氨基酸序列的90％以上相同的氨基酸序列构成，

(1)与序列号4表示的氨基酸序列的166位的赖氨酸相当的氨基酸；

(2)与序列号4表示的氨基酸序列的307位的甘氨酸相当的氨基酸；

(3)与序列号4表示的氨基酸序列的833位的丙氨酸相当的氨基酸。

7.一种基因，编码权利要求1～6中任一项所述的β-半乳糖苷酶。

8.一种重组DNA，其中，包含权利要求7所述的基因。

9.一种微生物，保有权利要求8所述的重组DNA。

10.一种酶剂，其中，包含权利要求1～6中任一项所述的β-半乳糖苷酶。

11.一种低聚糖的制造方法，其特征在于，使权利要求1～6中任一项所述的β-半乳糖苷酶作用于具有β-1，3键、β-1，4键和β-1，6键中的至少一个的二糖、低聚糖或多糖。

12.一种β-半乳糖苷酶的设计方法，其中，包括以下步骤(i)和(ii)：

(i)在基准β-半乳糖苷酶的氨基酸序列中，确定选自以下的(1)～(3)中的一个或二个以上的氨基酸的步骤，所述基准β-半乳糖苷酶由与序列号1～4的氨基酸序列的90％以上相同的氨基酸序列构成：

(1)与序列号4表示的氨基酸序列的166位的赖氨酸相当的氨基酸，

(2)与序列号4表示的氨基酸序列的307位的甘氨酸相当的氨基酸，

(3)与序列号4表示的氨基酸序列的833位的丙氨酸相当的氨基酸；

(ii)以基准β-半乳糖苷酶的氨基酸序列为基础，构建步骤(i)中确定的氨基酸被置换成脯氨酸的氨基酸序列的步骤。

13.根据权利要求12所述的设计方法，其中，基准β-半乳糖苷酶由序列号4表示的氨基酸序列构成。

14.一种β-半乳糖苷酶的制备方法，其中，包括以下步骤(I)～(III)：

(I)准备编码序列号9～15中任一个氨基酸序列、或者利用权利要求12或13所述的设计方法构建的氨基酸序列的核酸的步骤；

(II)使所述核酸表达的步骤，以及

(III)回收表达产物的步骤。