[发明专利]包被固体支持物的方法

说明书

本发明涉及一种用于包被固体支持物的方法，所述固体支持物适合用在细胞培养应用中。所述方法包括以下步骤：将载体蛋白的溶液加热到至少50℃，并在引起含2个至1000个蛋白分子的可溶性载体蛋白聚集体形成的条件下孵育所述载体蛋白的溶液，其中所述载体蛋白包括附着在其上或作为其氨基酸序列一部分的至少一种细胞功能调节肽序列。随后，在蛋白聚集体能非共价吸附至固体支持物的条件下，将蛋白聚集体与固体支持物接触。本发明还涉及经包被的固体支持物，所述经包被的固体支持物具有非共价吸附在其表面上的上述载体蛋白聚集体的至少一种聚集体。

技术领域

本发明涉及一种用于包被固体支持物的方法，所述固体支持物适合用在细胞培养应用中。该方法包括以下步骤：将载体蛋白(该载体蛋白包括附着在其上或作为其氨基酸序列一部分的至少一种细胞功能调节肽序列)溶液加热到至少50℃，并在引起含2个至1000个蛋白分子的可溶性载体蛋白聚集体形成的条件下进行孵育。随后，在蛋白聚集体能非共价吸附至固体支持物的条件下，将蛋白聚集体与固体支持物接触。本发明还涉及一种经包被的固体支持物，所述经包被的固体支持物具有在其表面上非共价吸附的至少一种上述载体蛋白聚集体。

背景技术

体外细胞培养通常在塑料细胞培养容器(例如，聚苯乙烯培养瓶或培养皿)中进行。这种培养瓶或培养皿在通常使用的37℃或更高的温度下非常稳定，同时它们还是透明的且易于制造。然而，目前可用于细胞培养的大多数细胞或细胞系未显示出足够的与疏水塑料表面的附着能力。因此，通过在未改性塑料表面上生长细胞所获得的结果通常较差。

为了克服细胞在塑料细胞培养瓶或培养皿上附着能力不足的问题，现有技术中提出了若干使这些物品表面更亲水的方法。例如，进行在表面上提供反应性亲水基团的等离子体处理。然而，已证明通过这些技术获得的表面改性产物不适用于某些应用，例如干细胞或高度分化的细胞的培养。此外，通过等离子体处理进行表面改性是昂贵且费力的。因此，开发了用于提供表面改性的培养容器的替代方法。

在细胞培养领域早已认识到，使用细胞外基质(ECM)的组分能极大地影响表面结合活细胞的能力。在体内，细胞主要通过形成部分ECM的结构蛋白的结合来彼此相互作用并且与它们的环境相互作用。发现了细胞与ECM的粘附相互作用影响许多重要的细胞活性，包括细胞生长、细胞分化、细胞迁移和组织形成。事实上，ECM参与许多复杂的生理过程，如形态发生、血管生成、伤口愈合和肿瘤转移。

ECM是组成上有差异的三维分子复合体，其包括生物活性蛋白(例如，层粘连蛋白和纤连蛋白)、糖蛋白、透明质酸、弹性蛋白、蛋白聚糖和胶原。细胞通过在其表面上表达的特异性表面受体的结合而与ECM相互作用。已知与ECM的组分相互作用的最著名的细胞表面受体是整联蛋白。在脊椎动物中，发现了24种整联蛋白亚型，每种亚型表现出不同的配体特异性。这些整联蛋白亚型总结于Barczyk et al.2010(Cell Tissue Res 339,269-280)和YurchencoPatton2009(Curr Pharma Des.15,1277-1294)中。一些整联蛋白与其ECM靶组分的结合受ECM分子中的特异性结合序列的影响。在许多基质蛋白，例如纤连蛋白、层粘连蛋白和骨桥蛋白中已经鉴定出的一著名结合序列是肽序列Arg-Gly-Asp(RGD)，该肽序列描述于Pierschbacher and Ruoslahti,J.Biol Chem 1987,262,17294-17298中。为了提高培养的细胞在支持物品如培养瓶或微量滴定板上的附着，现有技术中考虑将源自ECM的材料枝接到这些物品的表面。