[发明专利]包被固体支持物的方法

权利要求书

1.一种用于包被固体支持物的方法，所述固体支持物适合用在细胞培养应用中，所述方法包括：

(a)制备至少一种载体蛋白的溶液，所述载体蛋白包括附着于其上或作为其氨基酸序列一部分的至少一种细胞功能调节肽序列，其中所述细胞功能调节肽序列包括细胞结合肽基序，并且其中，所述载体蛋白是白蛋白或源自白蛋白的蛋白；

(b)将所述溶液加热到至少50℃，并在引起含2个至1000个蛋白分子的可溶性载体蛋白聚集体形成的条件下，孵育所述溶液；

(c)在使所述载体蛋白聚集体非共价吸附至所述固体支持物的条件下，将所述载体蛋白聚集体与所述固体支持物接触；

从而提供了在固体支持物表面上包括多种细胞功能调节肽序列的固体支持物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述固体支持物的表面是疏水的或亲水的。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在同一载体蛋白中或不同的载体蛋白中，使用2种、3种、4种、5种或更多种不同的细胞功能调节肽序列。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述蛋白聚集体包括5个至100个蛋白分子。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤(b)中，将所述溶液加热到50℃至75℃。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，在步骤(b)中，选择条件以获得至少50％的可溶形式的蛋白聚集体。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述细胞结合肽基序是RGD基序和/或选自SEQID NO：1～26所示序列中的细胞结合肽基序。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，至少一种所述细胞功能调节肽序列进一步包括选自SEQ ID NO：27～56中的具有生长因子活性的肽序列。

9.根据权利要求1、2或8所述的方法，其中，细胞功能调节肽被包括在所述载体蛋白中，以便形成细胞功能调节肽的分子嵌合体，所述细胞功能调节肽存在于聚集体的不同载体蛋白上或不同载体蛋白中。

10.根据权利要求5所述的方法，其中，在步骤(b)中，将所述溶液加热到65℃至73℃。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，在步骤(b)中，将所述溶液加热到68℃至72℃。

12.根据权利要求6所述的方法，其中，在步骤(b)中，选择条件以获得至少90％的可溶形式的蛋白聚集体。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法在步骤(c)后还包括：(d)洗涤所述固体支持物以去除未结合的载体蛋白和载体蛋白聚集体。

14.一种通过权利要求1～13中任一项的方法得到的经包被的固体支持物。

15.一种经包被的固体支持物，所述固体支持物具有非共价吸附在其表面上的至少一种载体蛋白聚集体，其中，所述载体蛋白是白蛋白或源自白蛋白的蛋白并包括附着于其上或作为其氨基酸序列一部分的至少一种细胞功能调节肽序列，所述细胞功能调节肽序列包括细胞结合肽基序；并且，所述聚集体包括2个至1000个蛋白分子。

16.根据权利要求15所述的经包被的固体支持物，其中，所述固体支持物的表面包括2种或更多种不同的细胞功能调节肽序列。

17.根据权利要求15或16所述的经包被的固体支持物，其中，在37℃孵育24小时后，从包被的表面去除少于30％的所述载体蛋白。