[发明专利]用于检测水解β‑内酰胺环抗微生物剂的酶活性的方法

权利要求书

1.用于在样品中检测β-内酰胺酶活性的方法，其特征在于，所述方法是阻抗测定法，包括以下步骤：

(i)在至少一个电化学电池中，使所述样品与具有所述β-内酰胺酶活性的至少一种底物接触；和

(ii)通过收集数据点来检测所述电化学电池中的阻抗变化；

其中所述至少一种底物包含β-内酰胺环。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(i)和(ii)同时进行。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其特征在于，所述β-内酰胺酶活性是碳青霉烯酶活性或头孢菌素酶活性。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品包含游离酶。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品包含生物细胞，优选为细菌。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述细菌是选自肠细菌细胞和非发酵性革兰氏阴性细菌细胞的革兰氏阴性细菌。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述底物选自青霉烷、头孢烯、单环β-内酰胺、碳青霉烯、碳青霉烷、氧青霉烷、青霉烯，碳头孢烯和氧头孢烯，或其组合，优选地，其中所述底物是亚胺培南。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一步骤在至少一种辅因子盐，优选为ZnSO₄的存在下进行。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述第一步骤在至少一种副盐，优选为CaCl₂、MnCl₂、MgCl₂、NaCl或KCl或其任何组合的存在下进行，所述组合例如为CaCl₂和MnCl₂或者CaCl₂和MgCl₂。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，还包括裂解所述生物细胞的步骤。

11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法不包括裂解所述生物细胞的步骤。

12.用于鉴定β-内酰胺酶活性的方法，包括以下步骤：

(i)在含有所述β-内酰胺酶活性的至少一种可能抑制剂的至少一个电化学电池中，使疑似具有所述β-内酰胺酶活性的样品与其至少一种底物接触；

(ii)在不含所述至少一种可能抑制剂的至少一个电化学电池中，使所述样品与所述至少一种底物接触；

(iii)通过收集数据点来检测步骤(i)和(ii)的所述电化学电池中的阻抗变化；和

(iv)比较在步骤(iii)中检测到的所述阻抗变化；

其中，所述至少一种底物包含β-内酰胺环。

13.用于筛选抑制β-内酰胺酶活性的候选抑制剂的方法，包括以下步骤：

(i)在至少一个电化学电池中，使具有所述β-内酰胺酶活性的样品与具有所述β-内酰胺酶活性的至少一种底物和至少一种候选抑制剂接触；

(ii)在不存在所述至少一种候选抑制剂的情况下，使所述样品与具有所述β-内酰胺酶活性的至少一种底物接触；

(iii)通过收集数据点来检测步骤(i)和(ii)的所述电化学电池中的阻抗变化；和

(iv)比较在步骤(iii)中检测到的所述阻抗变化；

其中，所述至少一种底物包含β-内酰胺环。

14.用于筛选不被β-内酰胺酶活性水解的候选β-内酰胺试剂(优选为抗微生物剂)的方法，包括以下步骤：

(i)在至少一个电化学电池中，使具有所述β-内酰胺酶活性(在生物细胞内或游离形式下)的样品与至少一种候选β-内酰胺试剂接触；

(ii)使所述样品与具有所述β-内酰胺酶活性的已知底物接触；

(iii)通过收集数据点来检测步骤(i)和(ii)的所述电化学电池中的阻抗变化；和

(iv)比较在步骤(iii)中检测到的所述阻抗变化；

其中，所述至少一种候选抗微生物剂包括β-内酰胺环。