[发明专利]改进的α‑Vβ‑8抗体

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求于2014年6月17日提交的美国专利申请序列号62/013,114的权益，将其全部内容通过引用结合在此。

发明背景

在无脊椎动物和脊椎动物物种的发育和成年生活期间，多功能细胞因子转化生长因子-β(TGF-β)影响免疫、内皮细胞、上皮细胞和间充质细胞。TGF-β在T-细胞、心脏、肺、血管，和腭发育中起作用。缺乏TGF-β1的小鼠，要么因卵黄囊血管生成缺陷死在子宫内，要么伴随严重的多器官自身免疫存活到成年。TGF-β信号传导介体Smad2的基因缺失表明，它在早期图式发育和中胚层的形成中是必不可少的。缺乏Smad3的小鼠是能生存的和能育的，但表现出肢体畸形、免疫失调、结肠炎、结肠癌，和肺泡扩张。在成体组织中，TGF-β途径参与免疫、间充质和上皮细胞的相互作用来维持响应环境应激的稳态。

通过TGF-β介导的稳态途径响应于慢性重复性损伤而被扰乱。TGF-β是响应于损伤的主要促纤维化细胞因子，其延迟上皮伤口愈合。TGF-β抑制上皮细胞的增殖和迁移，促进细胞凋亡，并通过诱导成纤维细胞募集，成纤维细胞收缩和细胞外基质沉积来扩展间充质隔室。腺病毒重组的TGF-β1向啮齿动物肺的气管内转移，显着增加了成纤维细胞积累以及气道周围和肺间质中的I型和III型胶原蛋白的表达。中和抗TGF-β抗体可以阻断博莱霉素或辐射诱导的肺纤维化。

增加的TGF-β活性可以在纤维化的肺部疾病，肾小球硬化症和心脏血管再狭窄中起作用，其主要是通过TGF-β1进行调节。人体中的TGF-β1功能是复杂的，如由涉及TGF-β1自身或其信号传导效应子的遗传性疾病所指示的。增加TGF-β途径活性的突变导致骨代谢缺陷(即，凯谬瑞蒂-英格曼(Camurati-Engelmann)病)、结缔组织缺陷(即，马凡氏综合征)，和主动脉瘤中的缺陷(即，劳伊思-迪茨(Loeys-Dietz)综合征)。导致TGF-β途径活性降低的突变与癌症相关。然而，TGF-β作为肿瘤抑制剂在癌症中的作用不是直接的，因为TGF-β还可以增强肿瘤生长和转移。

尽管TGF-β的多种基本功能，但单次剂量或短期给予泛-TGF-β中和抗体是良好耐受的。在抑制器官纤维化或癌细胞生长和转移的剂量下，在啮齿动物中没有观察到副作用。这种治疗还有效地抑制实验性纤维化。针对转移性肾细胞癌、黑素瘤、局灶性节段性肾小球硬化症和特发性肺纤维化，持续进行使用中和泛-TGF-β抗体的单剂量I/II期临床试验。

一些TGF-β同种型(TGF-β 1-3)在哺乳动物中普遍表达，但通过与前肽(TGF-β的潜伏相关结构域(LAP))的非共价相互作用维持在无活性形式。为了使TGFβ进行信号传导，它必须通过称为TGFβ激活的过程从其无活性复合物中释放。潜伏性TGF复合物包括3个组分：活性(成熟的)TGFβ二聚体，LAP(潜伏相关肽)和LTBP(潜伏性TGFβ结合蛋白)。LAP是二聚体，由两个二硫键连接，其表示的TGFβ前体蛋白的N-末端。成熟TGFβ蛋白代表前体的C-末端，并且形成约25kD的二硫键连接的二聚体。TGFβ和LAP之间的键是在高尔基体内经蛋白水解切割，但是TGF-β前肽通过非共价相互作用保持与TGFβ结合。TGFβ和LAP的复合物被称为小潜伏性复合物(SLC)。LAP和TGFβ的相关性赋予了潜伏性。LAP-TGFβ结合是可逆的，并且分离的纯化的组分可以重新结合以形成无活性的SLC。SLC和较大的复合物二者在本文中被称为潜伏性TGF-β，因为两者都是无活性的。

在一般情况下，整合素是粘附分子并且介导细胞对胞外基质蛋白的附着。整合素αvβ8结合TGF-β的LAP，并且介导TGF-β1和3的激活(木(Mu)等人(2002)细胞生物学杂志(J.Cell Biol.)159：493)。整合素αvβ8介导的TGF-β的激活是TGF-β的体内激活(即，成熟TGF-β多肽的释放)所需要的，因此αvβ8是TGF-β功能的把守分子。整合素αvβ8在正常上皮细胞(例如，气道上皮细胞)、间充质细胞和神经元组织中表达。整合素αvβ8介导的TGF-β的激活可导致COPD，肺纤维化，关节炎，炎症性肠病，肝和肾纤维化，炎症性脑自身免疫性疾病和脱髓鞘疾病(例如，MS、横贯性脊髓炎、德维克病、格林-巴利综合症)，神经炎症，肾病，以及癌症的生长和转移(参见，例如，WO 2013/026004)。

发明概述