[发明专利]用于单核细胞增多性李斯特菌检测的序列和它们的用法

说明书

相关专利申请的交叉引用

本专利申请要求2014年7月18日提交的美国临时申请序列号62/026,135的优先权，所述文献全文以引用方式并入。

技术领域

本技术领域涉及基于核酸序列的存在的检测单核细胞增多性李斯特菌血清型的方法，优选基于PCR的检测方法，以及涉及因此有用的寡核苷酸分子和试剂以及试剂盒。

背景技术

单核细胞增多性李斯特菌是与即食型食品(例如奶酪和熟肉制品)以及加工食品(例如热狗)相关的食源性疾病爆发的致病原。单核细胞增多性李斯特菌也是通常不与单核细胞增多性李斯特菌污染相关的甜瓜及其它食品有关的食源性疾病爆发的原因。李斯特菌病对于老年人和儿童可以极为致命，其死亡率高达40％。孕妇也易受所产生感染的影响，从而导致流产、死产或胎儿疾病。单核细胞增多性李斯特菌及其它李斯特氏菌属菌种是在有利于其持久生存的各种场所中常见的环境细菌。各种食品生产设施可提供能允许李斯特氏菌属菌种(包括单核细胞增多性李斯特菌)复制以及配料原料或食品制成品的可能污染的有利环境。李斯特氏菌属的许多菌种能够在冷藏温度下存活并且继续生长且数量增加。在相同的环境中可存在多个李斯特氏菌属的菌种。用于检测食品或食品制备环境中李斯特氏菌属菌种的典型微生物学方法在筛选测定开始后可需要至多五天。在等待筛选测定结果时，产品的生产者或销售商必须以相当可观的费用储存食品。在对李斯特氏菌属的存在的后续测试呈阳性的环境中制备的食物可能需要在装运之前就测定单核细胞增多性李斯特菌的存在或所报废库存的亏损。

因此，需要一种短时间出结果，准确度高，以及非常容易使用的检测单核细胞增多性李斯特菌的检定。

发明内容

一个方面是用于检测样品中单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)的存在的方法，所述样品包含核酸，所述方法包括：(a)提供反应混合物，所述反应混合物包含合适的引物对，该合适的引物对用于扩增单核细胞增多性李斯特菌的编码肌醇单酮异构酶的基因(例如，loll)的至少一部分，(b)使用步骤(a)的反应混合物进行所述样品的所述核酸的PCR扩增；以及(c)检测步骤(b)的扩增，从而扩增的阳性检出表明了样品中单核细胞增多性李斯特菌的存在。

另一个方面是一种引物，该引物包括基于BLASTN比对方法与如SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9和10所示的多核苷酸序列具有至少90％序列同一性的多核苷酸序列。

另一个方面是一种引物，该引物包括基于BLASTN比对方法与如SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9和10所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。

另一个方面是Scorpion探针，该Scorpion探针包括基于BLASTN比对方法与如

SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16所示的多核苷酸序列具有至少90％序列同一性的多核苷酸序列。

另一个方面是Scorpion探针，该Scorpion探针包括基于BLASTN比对方法与如SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。

另一个方面是单核细胞增多性李斯特菌检测序列，该检测序列包括基于BLASTN比对方法与如SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16所示的多核苷酸序列具有至少90％序列同一性的多核苷酸序列。

另一个方面是单核细胞增多性李斯特菌属检测序列，该检测序列包括基于BLASTN比对方法与如SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。