[发明专利]通过cupin超家族的蛋白质催化的(R)-选择性cupin-硝基醛醇反应

权利要求书

1.一种产生β硝基醇化合物的方法，其中醛或酮化合物在硝基烷烃化合物和cupin-硝基醛缩酶的存在下转化为相应的β硝基醇化合物，

所述cupin-硝基醛缩酶的氨基酸序列选自以下氨基酸序列组成的组：

SEQ ID NO:1进行了以下突变：A40H、A40R、V42T、Q110H之一或A40H和V42T二者，SEQ IDNO:3进行了以下突变：A40H、A40R、V42T或Q110H之一，SEQ ID NO:1，SEQ ID NO:2，SEQ IDNO:3，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10；

以及其中所述cupin-硝基醛缩酶包含锰、铁、镍、钴、铜或锌。

2.根据权利要求1所述的方法，其中式I的化合物与式II的化合物在cupin-硝基醛缩酶的存在下反应，得到式III的β硝基醇化合物

其中，

R¹和R²彼此独立地来自H、C_1-20烷基、C_3-10环烷基、C_4-20环烷基烷基、C_6-14芳基、C_7-20芳基烷基、3-14元杂环烷基、4-20元杂环烷基烷基、5-20元杂芳基或6-20元杂芳基烷基，任选被一个或多个R^a取代；

R³和R⁴彼此独立地来自H或C_1-20烷基，任选被一个或多个R^a取代；和

每个R^a独立地是H、卤素、-CF₃、-OR^b、-NR^bR^b、-(CH₂)_nCOOR^b、-(CH₂)_nC(＝O)R^b、-(CH₂)_nCONR^bR^b、C_1-20烷基、C_2-20烯基、或C_2-20炔基；和

各自的R^b独立地为H或任选地取代的C_1-20烷基、C_2-20烯基、或C_2-20炔基；和

n为0、1、2或3。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述反应在单或双相系统或在乳液中进行。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述β硝基醇化合物在至少55％对映体过量(e.e.)下获得。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述β-硝基醇化合物在至少10％的转化率下获得。

6.cupin-硝基醛缩酶的变体，其特征在于其氨基酸序列选自以下氨基酸序列组成的组：

SEQ ID NO:1进行了以下突变：A40H、A40R、V42T、Q110H之一或A40H和V42T二者，SEQ IDNO:3进行了以下突变：A40H、A40R、V42T或Q110H之一，SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4；

以及其中所述变体包含锰、铁、镍、钴、铜或锌。

7.分离的多核酸分子，其编码根据权利要求6所述的cupin-硝基醛缩酶的变体。

8.载体，包含权利要求7所述的分离的多核酸分子。

9.重组非人类细胞，其通过引入权利要求8所述的载体获得。

10.培养物，其通过培养权利要求9所述的重组非人类细胞获得。