[发明专利]一种TRAIL双靶点突变蛋白MuR6S4TR、其制备方法及其应用

说明书

本发明属于基因工程药物领域，提供了一种TRAIL的突变蛋白MuR6S4TR、其制备方法及用途。该突变蛋白氨基酸序列N端的第2‑11位由穿膜肽序列RRRRR(R6)和凋亡抑制因子XIAP的结合序列AVPI组成，第12‑169位为TRAIL蛋白肽段(124‑281aa)，具体序列如SEQ ID NO:2所示。

技术领域

本发明涉及基因工程药物领域，特别涉及一种TRAIL双靶点突变蛋白MuR6S4TR、制备方法及应用，本发明中的TRAIL双靶点突变蛋白MuR6S4TR对于多种不同类型的肿瘤具有优越的治疗作用，是极具潜力的新一代高效诱导肿瘤细胞凋亡药物。

背景技术

1、Apo 2L/TRAIL用于肿瘤治疗的进展及意义

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)为肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor，TNF)超家族的成员，其基因序列分别于1995年由Wiley等人和1996年由Pitti等人独立克隆获得，后者将其命名为凋亡素2配体(Apo 2Ligand，Apo 2L)。后来的研究证实，Apo 2L与TRAIL实质上是同一种蛋白质，因此习惯上可将其称为Apo 2L/TRAIL。TRAIL的功能首先是作为生物体先天性或获得性免疫的调节剂，其次在细胞外源性凋亡途径中作为免疫监视发挥抗肿瘤作用。TRAIL的最大优点是可以选择性地诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞几乎没有毒性。研究资料表明，无论在体外还是体内，Apo 2L/TRAIL对于各种来源的人肿瘤细胞系，包括结(直)肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌、中枢神经系统肿瘤、甲状腺癌、淋巴瘤、白血病以及多发性骨髓瘤等都具有诱导凋亡的作用。

从发现至今的近20年时间里，TRAIL一直被作为一种重要的潜在抗肿瘤药物开发，TRAIL的临床实验在国外已进入Ⅱ期，在国内已完成Ⅲ期。大量体内外试验均证实，TRAIL具有肿瘤特异性细胞毒性，尤其当它与小剂量化疗药物联用时即表现出明显的协同和增效作用。相反，研究发现机体中凋亡机制的缺失导致的TRAIL耐受与肿瘤细胞的快速生长和转移明确相关。

肿瘤是一组高度异质性的疾病，传统上按照组织器官、病理改变的分型方法已经不适合肿瘤的诊疗，目前的研究方向在于阐明不同肿瘤细胞的基因表达、分子分型，给予患者更具针对性的治疗。对于抗肿瘤药物认识的深入使人们了解到，无论细胞毒性药物、分子靶向药物还是单克隆抗体，其发挥作用的过程中均涉及到肿瘤细胞凋亡途径的激活。诱导肿瘤细胞凋亡的信号通路途径是这些药物发挥作用的枢纽和中心环节，而凋亡逃避正是肿瘤发生发展以及耐药的重要机制。

2、Apo 2L/TRAIL用于肿瘤治疗的缺陷和对策

最近进展显示，仅依赖Apo 2L/TRAIL治疗多种不同类型的肿瘤仍是远远不够的。尽管重组Apo 2L/TRAIL或TRAIL受体DR4/DR5的激动性单克隆抗体在Ⅰ期临床治疗中取得令人鼓舞的结果，但在随后进行的Ⅱ期临床研究中却没有显示出明确的临床受益。大量研究表明，正常细胞以及大约一半(甚至高达60％)以上的传代肿瘤细胞株对TRAIL表现出耐药。根据Roberta di peitro和Giorgia zauli的综述，Apo 2L/TRAIL对已经研究的92株原代或传代肿瘤细胞中的61株敏感，敏感率为66.3％，而对其余的31株耐药，耐药率为33.7％。TRAIL对正常细胞的耐受有着其生理意义，TRAIL在体内保持着精准的调控，只在生长发育过程中清除衰老退化和转化细胞中发挥作用，而不至于对正常细胞产生杀伤。几乎所有的TRAIL敏感肿瘤细胞在其凋亡信号通路中的各个环节和因素均具有相似的完整和功能，而每一种TRAIL耐药肿瘤细胞均在凋亡信号通路中的一些环节和因素存在缺陷和变异，这些缺陷和变异使得这些耐药的肿瘤细胞凋亡阈值异常升高，较易逃避凋亡清除，从而持续生长增殖。