[发明专利]一种花生纳米肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种采用高压微射流方法物理改性花生蛋白提高酶解效率制备高ACE抑制活性花生纳米肽的方法，该方法的步骤包括：制备花生分离蛋白，高压微射流处理，中性蛋白酶和复合蛋白酶连续酶解、灭酶、离心、超滤、干燥后获得具有高ACE抑制活性的花生纳米肽。本发明提高了酶解效率，降低了生产成本，所获得的花生纳米肽的粒径为14.4nm，ACE抑制IC50值为0.192mg/mL，表现了良好的ACE抑制活性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的，涉及一种花生纳米肽的制备方法。

背景技术

花生蛋白为制备具有优良生理活性短肽的重要蛋白源，一些花生蛋白酶解产物、三肽、四肽和六肽等陆续被发现具有较好的ACE抑制活性，但ACE抑制单体肽因为需要经过高成本、低得率的酶解、纯化工艺，因此实际应用有限。提高酶解效率、充分挖掘花生蛋白中蕴藏的大量高生理活性短肽，同时适当降低生产成本，提高混合型花生短肽在功能食品中的应用，成为花生短肽的重要发展方向，而对花生蛋白进行物理改性就是一个具有实际应用价值的有效方案。

动态高压微射流(DHPM)技术是一种新兴的物理处理手段，其工作原理是通过高速碰撞、高频振荡、瞬时压降、强烈剪切等作用实现对物料的改性，能够实现对物料的改性或者改变大分子的结构。高压微射流处理目前已经成为提高蛋白质功能性质的一种有效方法，但采用高压微射流改性蛋白质以有利于短肽制备的研究尚未见报道。

因此有必要开发利用高压微射流方法对蛋白质进物理行改性的技术，从而为制备具有高生物活性的短肽产品提供新的有效的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用高压微射流处理提高酶解效率制备高ACE抑制活性花生纳米肽的方法。

为达到以上目的，本发明提供了一种花生纳米肽的制备方法，该方法包括以下步骤：

步骤一：将花生蛋白制备成花生分离蛋白；

步骤二：将花生分离蛋白配制成质量体积比浓度为4-6％的花生分离蛋白水溶液，采用高压微射流在100-135MPa压力下循环处理2-4次后干燥，得到物理改性的花生分离蛋白；

步骤三：将所述物理改性的花生分离蛋白配制成质量体积比浓度为8-10％的水溶液，加入中性蛋白酶，酶解反应80-110min；得到中间酶解液(即第一次酶解液)；

步骤四：在中间酶解液中加入复合蛋白酶，酶解反应80-110min，得到最终酶解产物；

步骤五：对所得酶解产物进行灭酶处理，离心取上清液，取分子量小于1KD的滤过液，干燥后获得纳米肽。所述纳米肽为高ACE抑制活性纳米肽。

图1为本发明所述高压微射流处理提高酶解效率制备高ACE抑制活性花生纳米肽的方法示意图。

优选的，所述花生分离蛋白由如下的碱溶酸沉方法制备而成：将花生蛋白粉与去离子水混合，制备质量体积比浓度为9-11％的花生蛋白溶液，调节pH值至7.8-8.2，搅拌溶解110-130min；3800-4200rpm离心14-16min；取上清液，调节pH值至4.4-4.6，静置沉淀50-70min；3800-4200rpm离心14-16min；取沉淀，加水溶解，调节pH值至6.8-7.2，搅拌溶解100-140min；喷雾干燥，得花生分离蛋白。

优选的，在步骤一中，所述花生分离蛋白中蛋白含量大于85％。

其中，可以利用NaOH和HCl进行pH值调节。

其中，步骤二中，通过高压微射流处理对花生分离蛋白进行物理改性，通过高压微射流的高速碰撞、高频振荡、瞬时压降、强烈剪切等作用实现对物料的改性，使蛋白质结构解聚，以暴露更多的酶切位点，增进酶的作用效率。

优选的，在步骤二中；高压微射流的压力为110-125MPa，循环次数为3次。