[发明专利]诱导间充质干细胞定向分化为Leydig细胞的方法及其用途有效
| 申请号： | 201511023759.2 | 申请日： | 2015-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN106929466B | 公开（公告）日： | 2020-06-19 |
| 发明（设计）人： | 赵春华;毛晓晶 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院基础医学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京戈程知识产权代理有限公司 11314 | 代理人： | 程伟;韩文华 |
| 地址： | 100005*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诱导 间充质 干细胞 定向 化为 leydig 细胞 方法 及其 用途 | ||
1.一种体外诱导来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞定向分化为Leydig细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
a)在适合于细胞生长的条件下培养来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞；
b)在步骤a)中培养的来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞至亚融合状态时，向培养基中添加100IU/ml人绒毛膜促性腺激素、20ng/ml胰岛素样生长因子-1、10ng/ml人血小板源性生长因子以及0.0005ng/ml白介素1-α；
c)继续培养0-14天后，收集并鉴定定向分化的Leydig细胞；
其中所述来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞呈上皮样形态，具有Flk1阳性的表型，具有三胚层多谱系的分化能力，但不具有成瘤性。
2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤b)中进一步加入1X ITS或1％FBS。
3.一种体外诱导细胞培养上清液中分泌睾酮的方法，所述方法包括以下步骤：
a)在适合于细胞生长的条件下培养来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞；
b)在步骤a)中培养的来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞至亚融合状态时，向培养基中添加100IU/ml人绒毛膜促性腺激素、20ng/ml胰岛素样生长因子-1、10ng/ml人血小板源性生长因子以及0.0005ng/ml白介素1-α；
c)继续培养0-14天后，收集上清液并测定睾酮的含量；
其中所述来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞呈上皮样形态，具有Flk1阳性的表型，具有三胚层多谱系的分化能力，但不具有成瘤性。
4.一种组合物，其用于体外诱导来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞定向分化为Leydig细胞，所述组合物由100IU/ml人绒毛膜促性腺激素、20ng/ml胰岛素样生长因子-1、10ng/ml人血小板源性生长因子以及0.0005ng/ml白介素1-α组成；
其中所述来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞呈上皮样形态，具有Flk1阳性的表型，具有三胚层多谱系的分化能力，但不具有成瘤性。
5.一种组合物，其用于体外诱导来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞定向分化为Leydig细胞，所述组合物由100IU/ml人绒毛膜促性腺激素、20ng/ml胰岛素样生长因子-1、10ng/ml人血小板源性生长因子、0.0005ng/ml白介素1-α和1XITS或1％FBS组成；
其中所述来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞呈上皮样形态，具有Flk1阳性的表型，具有三胚层多谱系的分化能力，但不具有成瘤性。
6.根据权利要求4或5所述的组合物用于体外诱导来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞定向分化为Leydig细胞的用途；
其中所述来源于哺乳动物胎盘的间充质干细胞呈上皮样形态，具有Flk1阳性的表型，具有三胚层多谱系的分化能力，但不具有成瘤性。
7.根据权利要求4或5所述的组合物用于体外诱导细胞培养上清液中分泌睾酮的用途。
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