[发明专利]一种用于二乙酰精胺(DAS)检测的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及检测二乙酰精胺(N1,N¹²-Diacetylspermine,简称DAS)含量的方法，具 体的说是一种用于二乙酰精胺(DAS)检测的试剂盒。

背景技术

大肠癌包括结肠癌和直肠癌，大肠癌在全世界的发病率在恶性肿瘤中排在第三 位，在我国的发病率排在第五位，我国男性的肠癌发病率是十万分之十六，女性为十万分之 十四，是最常见的肿瘤之一。西方人主要是以结肠为主，70％到80％患者所患为结肠癌，直 肠癌患者占20％到30％。我国却相反，直肠癌患者占60％到70％，结肠癌占30％到40％。近 年的研究分析发现，我国的直肠癌发病率基本保持不变，结肠癌发病比例却在上升。尽管化 疗对转移性结肠癌患者有效，但预后较差。因此，研究制备用于检测结肠癌患者肿瘤标志物 含量的试剂盒具有重要的社会意义和科学价值。

多胺包括腐胺、尸胺、亚精胺和精胺,是一类具有生物活性含氮的低分子量有机化 合物的总称。可看作是氨分子中1-3个氢原子被烷基或芳基取代后而生成的物质。可以由原 核和真核细胞产生。快速生长的组织通常有活跃的多胺合成系统，含有大量的多胺。当体内 存在这样的组织时，尿液中多胺的合成会增加。先前的研究表明与健康人相比，癌症患者尿 液中多胺的含量增加。然而，后续的研究显示尿液中总的及游离的多胺含量由于产生了大 量的假阳性和阴性结果，因而不能作为可靠的肿瘤标志物。

DAS分子式为C₁₄H₃₀N₄O₂，分子量286.41，是一种多胺的二乙酰基衍生物，在体内由 鸟氨酸经鸟氨酸脱羧酶作用生成。二乙酰精胺是肿瘤细胞的代谢产物，排泄到尿中。细胞癌 变后，乙酰基多胺分泌增加，导致肿瘤患者尿液中二乙酰精胺浓度明显升高。DAS的早期检 测是通过高效液相色谱法(HPLC)完成的，后来建立了适用于尿液中DAS含量检测的酶联免 疫吸附系统。有研究显示，尿液中DAS表达量的检测可以作为结肠癌、乳腺癌和肝癌有效的 新型肿瘤标志物。至此，用于尿液中DAS含量检测的ELISA检测方法得到了广泛的临床研究。 但ELISA检测方法同样存在操作复杂，不能批量检测等问题。本发明开发的利用全自动生化 分析仪检测患者样本中DAS含量的比浊法检测试剂盒，是一种比ELISA检测方法更为方便、 快捷的检测技术，能够一次对大量样本进行检测，并且其灵敏度高，操作简单。

发明内容：

本发明目的在于提供一种二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，包括R1试剂，R2试剂，标准品 和质控品，所述R1试剂为将二乙酰精胺抗体偶联在纳米颗粒上，添加保护液后以液体形态 或者冻干后的固定形态保存的试剂；所述的R2试剂为将乙酰精胺(DAS)分子通过偶联试剂 偶联在载体蛋白上，以液体形态或者冻干后的固体形态保存的试剂。

所述二乙酰精胺抗体是以乙酰精胺(DAS)分子通过偶联试剂偶联在载体蛋白上所 得的产物作为免疫原，再免疫动物获得多克隆抗体或经筛选获得单克隆抗体。

所述R1中保护液按重量百分比计为：0.1-0.5％的Tris、0.5-2％的PVP40、0.5-1％ 的BSA、0.1-0.5％的PEG20000、2-5％的蔗糖、0.01-0.8％的TWEEN20、0.02-0.1％的叠氮钠、 0.85-1.5％的NaCl、1-4％的PEG6000，余量为水。

所述的样本包含但不限于血清、血浆、尿液等。所述纳米颗粒包括但不限于纳米 金、微球等。所述载体蛋白包括但不限于血清白蛋白(BSA)、多聚赖氨酸、卵清蛋白等。

所述偶联试剂为碳二亚酰胺类或马来酰亚胺类；其中，碳二亚酰胺类为EDC,1-乙 基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳二亚胺或N-羟基琥珀酰亚胺酯类(NHS酯)；马来酰亚胺类为4- 马来酰亚胺基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯(GMBS)或4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥 珀酰亚胺酯(SMCC)。