[发明专利]一种用于二乙酰精胺(DAS)检测的试剂盒

权利要求书

1.一种二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，包括R1试剂，R2试剂，标准品和 质控品，其特征在于：所述R1试剂为将二乙酰精胺抗体偶联在纳米颗粒上，并添加保护液 后，以液体形态或者冻干后的固定形态保存的试剂；所述的R2试剂为将乙酰精胺(DAS)分子 通过偶联试剂偶联在载体蛋白上，以液体形态或者冻干后的固体形态保存的试剂。

2.按权利要求1所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所 述二乙酰精胺抗体是以乙酰精胺(DAS)分子通过偶联试剂偶联在载体蛋白上所得的产物作 为免疫原，免疫动物得多克隆抗体或经筛选得单克隆抗体。

3.按权利要求1所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所 述R1中保护液按重量百分比计为：0.1-0.5％的Tris、0.5-2％的PVP40、0.5-1％的BSA、 0.1-0.5％的PEG20000、2-5％的蔗糖、0.01-0.8％的TWEEN20、0.02-0.1％的叠氮钠、0.85- 1.5％的NaCl、1-4％的PEG6000，余量为水。

4.按权利要求1所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：所 述偶联试剂为碳二亚酰胺类或马来酰亚胺类；其中，碳二亚酰胺类为EDC,1-乙基-3-(3-二 甲基氨丙基)-碳二亚胺或N-羟基琥珀酰亚胺酯类(NHS酯)；马来酰亚胺类为4-马来酰亚胺 基丁酸-N-琥珀酰亚胺酯(GMBS)或4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯 (SMCC)。

5.按权利要求2或4所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于： 所述二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白是以碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)作为 偶联试剂，将活化处理后的载体蛋白加入至过量的0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS中，再 加入水溶性的碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，混匀至清澈透明，而后室温下静 置15-30分钟；静置后加入过量的乙酰精胺，混匀至清澈透明，调节体系PH值调至10-12，室 温下反应4-6小时；反应后经透析所得产物，即得二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白。

6.按权利要求2或4所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于： 所述二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白是以碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)作为 偶联试剂，将活化处理后的载体蛋白加入至过量的0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS中，再 加入水溶性的碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，混匀至清澈透明，而后室温下静 置15-30分钟；静置后加入精胺，混匀至清澈透明，调节体系PH值调至10-12，室温下反应4-6 小时；反应后经透析所得产物在2-8℃中，向反应体系内加入酰化剂，而后再于2-8℃下反应 1-3小时，反应物经透析即得二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白。

7.按权利要求2或4所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于： 所述二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白是以N-[γ-马来酰亚胺丁酰氧]琥珀酰亚胺酯 (GMBS)作为偶联试剂，将酰化剂(乙酸酐或无水乙酸或乙酰氯)与精胺在2-8℃下反应60- 90min，反应后与偶联剂(GMBS)在0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS中混合，室温下反应3-4 小时，得乙酰精胺-GMBS偶联产物；将载体蛋白与乙酰巯基琥珀酸在0.01M-0.1M的pH＝6.5- 8.0的PBS中混合，室温下反应3-5小时；反应后加入0.1M羟胺，室温下反应30-35分钟除去乙 酰基；0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS中透析，得巯基化修饰的BSA；将乙酰精胺-GMBS偶联 产物与上述巯基化修饰的BSA混合，室温下反应4-6小时；0.01M-0.1M的pH＝6.5-8.0的PBS 中透析得二乙酰精胺(DAS)分子偶联载体蛋白。

8.按权利要求1所述的二乙酰精胺(DAS)免疫比浊法体外检测试剂盒，其特征在于：利 用所述试剂盒通过免疫比浊竞争抑制法检测样本中的二乙酰精胺。