[发明专利]活跃链霉菌LB-16及利用其制备那西肽的方法

说明书

本发明涉及一种活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB‑16。本发明还涉及一种产生活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB‑16的方法，采用紫外和亚硝基胍对活跃链霉菌CN10联合诱变，筛选得到活跃链霉菌LB‑16。本发明还涉及一种利用活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB‑16制备那西肽的方法，采取变温培养，通气流量采取分阶段控制，采用有机溶剂法、树脂分离、乙醇和水混合沉淀提取分离得到那西肽粗品，并采用离子交换层析法分离纯化得到那西肽精品。本发明具有生产成本低、产品提取率高和产品生物价效高的特点。

技术领域

本发明涉及一种活跃链霉菌。更具体地说，本发明涉及一种活跃链霉菌LB-16及利用其制备那西肽的方法。

背景技术

那西肽(Nosiheptide)又称诺西肽，是一种含有多个噻唑环并富含硫多肽类抗生素，与硫链丝菌肽(Thiostreton)、盐屋霉素(siomyein)、微球菌素(Mierococcins)、硫肽霉素(Tiopeptin)属于同一类化合物。那西肽作为一种新型的饲料添加剂，在国内外已得到了广泛的认可，它不但能促进动物生长，提高饲料效率，而且具有不易产生耐药性，无残留，安全性高，对环境友好等特点，该产品在日本、东南亚和中国台湾等地也在广泛使用。但目前国内企业所需的那西肽主要依赖进口。

生产那西肽的方法主要为发酵法，申请号为201310027757.5的专利中给出了一种利用半光胺酸来提高那西肽产量的方法，但是该方法比较简单，也没有给出提取方法，作为工业化大生产有一定的难度。申请号为201210469137.2的专利公布一种利用活跃链酶菌接到斜面培养基中得到种子液，然后发酵培养得到那西肽的方法，该方法虽然操作简单，但是生产得到那西肽的收率低，同样也不适合工业化。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种生产力强、菌丝产量高的活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16；

本发明又一目的是提供一种产生活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16的方法，产品生成率和分离纯化效率均较高；

本发明再一目的是提供一种利用活跃链霉菌Streptomyces actuosus LB-16制备那西肽的方法，提取率和生物效价均较高。

为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供了一种活跃链霉菌Streptomycesactuosus LB-16：

其分类命名为活跃链霉菌Streptomyces actuosus，所述活跃链霉菌LB-16被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.11732，保藏时间为：2015年11月25日，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，本发明中称为活跃链霉菌LB-16。

一种产生所述的活跃链霉菌LB-16的方法，包括如下步骤：

步骤一、将活跃链霉菌单孢子液用紫外灯于距离所述单孢子液35cm处照射20～30s，稀释培养的温度为28℃，相对湿度为40～50％，24h后平皿倒置培养，然后培养6～7天后，选取长势较好的单个菌落，接种于斜面培养基，获得突变的活跃链霉菌CN10；

步骤二、将步骤一得到的突变的活跃链霉菌CN10用pH6.0的Tris-Hcl溶液处理，得到第二孢子悬浮液，将亚硝基胍溶于pH6.0的Tris-Hcl溶液，得到亚硝基胍的原液，然后将第二孢子悬浮液和亚硝基胍的原液以体积比为1:1混合，使亚硝基胍的浓度为300～500μg/mL，以控制化学制剂的诱变强度，然后在26～30℃下诱变120～130min，筛选得到活跃链霉菌LB-16。