[发明专利]猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括猪瘟病毒5’UTR引物和DNA/RNA杂合探针；

所述猪瘟病毒5’UTR引物包括：

猪瘟病毒5’UTR上游引物：5’-GGGCTAGCCATGCCCATAGTA-3’；

猪瘟病毒5’UTR下游引物：5’-TTCGACGTGAGCAGAAGCC-3’；

所述DNA/RNA杂合探针包括：

所述野毒株DNA/RNA杂合探针：5’-AGTCCCTCCGTTTGC-3’；

所述疫苗株DNA/RNA杂合探针：5’-AGTCCCTCCGTTTTGC-3’。

2.如权利要求1所述的猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒，其特征在于，所述DNA/RNA杂合探针为采用不同荧光标记物进行编码标记的DNA/RNA杂合探针，包括：

所述野毒株DNA/RNA杂合探针：

5’-FAM-AGTCCCTCCGTTTGC-DABCYL-3’；

所述疫苗株DNA/RNA杂合探针：

5’-HEX-AGTCCCTCCGTTTTGC-DABCYL-3’。

3.如权利要求1所述的猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液还包括M-MLV逆转录酶、Taq酶、dNTPs、不含镁离子的缓冲液、氯化镁、溴酚蓝、RnaseH。

4.如权利要求3所述的猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒，其特征在于，所述溴酚蓝、M-MLV逆转录酶、Taq酶、RnaseH与所述不含镁离子的缓冲液、氯化镁、dNTPs、猪瘟病毒5’UTR引物和DNA/RNA杂合探针采用石蜡隔离。

5.如权利要求1-4任一所述的猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照，所述阳性对照包括猪瘟病毒野毒株和疫苗株的基因组RNA。

6.如权利要求1-4任一所述的猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照，所述阴性对照为不含有猪瘟病毒野毒株和疫苗株基因组RNA的Tris-EDTA缓冲液。

7.如权利要求1-4任一所述的猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液的组成如下所述：

8.一种猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测方法，其特征在于，该方法使用如权利要求1-7任一项所述猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测试剂盒进行检测，包括以下步骤：

样本RNA提取；

RT-PCR一步法检测；

结果判断；

其中，所述实时荧光PCR检测的参数设置为：

42-50℃：10-15min；

92-95℃：2-3min；

92-95℃：5-10S，55-60℃：40-80S；40个循环。

9.如权利要求8所述的猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针法检测方法，其特征在于，所述RT-PCR一步法检测时，对不同的所述DNA/RNA杂合探针采用荧光标记物进行多色组合探针编码标记，使所述猪瘟病毒DNA/RNA杂合探针上标记的荧光信号不相同。