[发明专利]一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法

权利要求书

1.一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，该方法利用化学共沉淀法制备Fe₃O₄磁性颗粒，并以Fe₃O₄磁性颗粒为磁核通过乳化交联法制备磁性壳聚糖微球，用环氧氯丙烷对磁性壳聚糖微球表面进行活化，用于黄嘌呤氧化酶的固定化研究。

2.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，所述化学共沉淀法制备Fe₃O₄磁性颗粒的步骤为：将摩尔比为3:1~1:1的FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O混合，氮气保护下滴加NaOH溶液，至溶液变为黑亮色，30~50°C下搅拌30~40min，结束后加入0.5~1mL油酸，于70~80oC水浴振荡下熟化30~60min，超声10~20min；冷却后用磁铁吸附，用无水乙醇和去离子水洗涤，干燥，得Fe₃O₄磁性颗粒。

3.根据权利要求2所述的一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，所述FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O的摩尔比为4:3~2:1。

4.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，所述乳化交联法制备磁性壳聚糖微球的步骤为：制备10~15mg/mL的壳聚糖醋酸溶液，在溶液中加入Fe₃O₄磁性颗粒，超声分散30~40min；分散结束后，加入80~120mL液体石蜡、1.5~3mL吐温-80、1.5~3gSpan-80，在40~60oC水浴条件下搅拌30~40min；逐滴加入1~5ml戊二醛溶液，升温至60~70oC，搅拌1~1.5h，逐滴滴加NaOH溶液调节pH至9.0~11.0，置于70~75oC恒温振荡1~1.5h，超声10~15min；冷却后用磁铁吸附分离，用无水乙醇和去离子水洗涤，干燥，得磁性壳聚糖微球。

5.根据权利要求4所述的一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，壳聚糖与Fe₃O₄磁性颗粒的质量比为2:1~1:2，水相与油相的体积比为1:3~1:6，戊二醛的体积分数为10~50%。

6.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，所述对磁性壳聚糖微球表面进行活化的步骤为：称取磁性壳聚糖微球于离心管内，加入NaOH溶液与环氧氯丙烷溶液，搅拌混匀，加入NaBH₄溶液，恒温水浴振荡反应3~5h。

7.根据权利要求6所述的一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，所述NaOH溶液的浓度为0.2~1.6mol/L，环氧氯丙烷溶液的体积分数为10~50%，NaBH₄溶液的浓度为0.3~1.5g/L。

8.根据权利要求1所述的一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，所述黄嘌呤氧化酶的固定化步骤为：称取0.01~0.05g经过活化的磁性壳聚糖微球于离心管中，加入100~500μL黄嘌呤氧化酶酶液，2~4mLTris-HCl缓冲液，在水浴震荡下进行固定化，得磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶。

9.根据权利要求8所述的一种磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶的制备方法，其特征在于，所述固定化时间为30~180min，固定化温度为25~60oC，固定化pH为6.0~10.0。