[发明专利]用于培养病毒的无血清培养液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养液及其制备方法，具体涉及用于培养病毒的无血清培养液及 其制备方法。

背景技术

1996年以来，哺乳动物细胞培养已经发展到能够自由扩大培养并且用于工业化 生产。许多生物活性物质、疫苗、载体,如单克隆抗体、药用蛋白质、高职病性蓝耳病疫等， 都可以通过动物细胞大规模培养获得。通过细胞培养生产生物制品既能提高生物制品的质 量,又能促进细胞培养技术、蛋白质表达纯化技术、病毒培养技术等的发展。

目前，兽用疫苗很多都需要通过细胞培养来进行生产，在生产过程需要使用血清。 血清培养存在成分不明确；保存期短；取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响， 可能导致实验失败或实验结果不可靠性；制作过程复杂、批间差异大，成分不能保持一致， 使用使得实验和生产的标准化困难；质量不稳定，价格昂贵，进出口管制影响盈利.，使用不 方便等缺点。而无血清培养可以消除来自血清的不均一性；降低生产成本，简化分离纯化步 骤，避免病毒污染造成的危害；提高了细胞培养的可重复性，避免了由于血清批次之间差异 的影响；供应充足、稳定。因此从当前发趋势来看无血清培养，是近年世界范围内各大生物 公司产业化生产的发展方向。

中国专利申请201410467191.2公开了无血清培养基及其用途和一种猪瘟病毒的 培养方法，无血清培养基，所述无血清培养基为pH为7.0~7.5的水溶液，其组分如下：MEM 基础培养基；丙酮酸钠；大豆蛋白水解物；胆固醇；碱性成纤维细胞生长因子；抑制素B；胰岛 素；L-丙氨酸；L-缬氨酸；L-亮氨酸；L-异亮氨酸；L-甲硫氨酸；L-脯氨酸；L-苯丙氨 酸；L-色氨酸；L-甘氨酸；L-丝氨酸；L-苏氨酸；L-半胱氨酸；L-天冬酰胺；L-谷氨酰 胺；L-酪氨酸；L-天冬氨酸；L-谷氨酸；L-赖氨酸；L-精氨酸；L-组氨酸；羟脯氨酸；豆 蔻酸；棕榈酸；棕榈油酸；硬脂酸；精胺；亚精胺；还原型谷胱甘肽；乙醇胺；β-巯基乙醇；甘 油；生物素；吡哆醇；抗坏血酸；维生素B-12；次黄嘌呤；胸苷；NaHCO3；FeSO47H2O；ZnSO4； Na2SeO3；柠檬酸铁。该培养基成分复杂，不利于制备，生产成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生产成本低，易于制备的用于培养病毒的培养液及其 制备方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：用于培养病毒的无血清培养液， 包括DMEM培养基，还包括如下组分及其浓度：胰岛素5~45mg/L、牛血清白蛋白0.5~3mg/ mL、微量元素0.1~2mg/L、酵母提取物0.2~3g/L、氨基酸溶液2~5mg/L、纤连蛋白0.2~ 1.5mg/mL、辅酶R0.01~0.15mg/L、烟酸0.5~2mg/L和维生素C0.5~2mg/L。

优选地，所述的用于培养病毒的无血清培养液，包括DMEM培养基，还包括如下组分 及其浓度：胰岛素5mg/L、牛血清白蛋白0.5mg/mL、微量元素0.5mg/L、酵母提取物0.2g/L、 氨基酸溶液2mg/L、纤连蛋白0.2mg/mL、辅酶R0.01mg/L、烟酸0.5mg/L和维生素C0.5 mg/L。

优选地，所述的用于培养病毒的无血清培养液，包括DMEM培养基，其特征在于还包 括如下组分及其浓度：胰岛素25mg/L、牛血清白蛋白2mg/mL、微量元素1mg/L、酵母提取物 1.5g/L、氨基酸溶液2.5mg/L、纤连蛋白1mg/mL、辅酶R0.5mg/L、烟酸1mg/L、维生素C1mg/ L。

优选地，所述的用于培养病毒的无血清培养液，包括DMEM培养基，其特征在于还包 括如下组分及其浓度：胰岛素45mg/L、牛血清白蛋白3mg/mL、微量元素2mg/L、酵母提取物 3g/L、氨基酸溶液5mg/L、纤连蛋白1.5mg/mL、辅酶R0.15mg/L、烟酸2mg/L和维生素C2 mg/L。