[发明专利]一种培养Vero细胞用的无血清培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制品领域，涉及一种培养Vero细胞用的无血清培养基及其制备方法。

背景技术

自1995年WHO呼吁采用细胞为基质生产疫苗，细胞培养在疫苗生产过程中发挥的作用越来越受人们的重视。而过去，在使用血清培养细胞的过程中，增加了细胞表达产物安全性的不确定因素，并且采用含血清的培养基进行细胞的培养，可能由于血清的存在导致过敏反应发生、批次间差异大、易受污染和成本较高等缺点，这一现实问题已经成为动物细胞无血清培养技术研究和应用的发展动力。随着无血清培养技术的不断进步，无血清培养已成为包括疫苗在内的生物技术药物生产的总趋势。

Vero细胞是WHO允许用于疫苗生产的细胞株，它对多种病毒敏感，是现阶段病毒疫苗生产的最主要的细胞基质。Vero细胞无血清培养技术提高了病毒疫苗生产工艺的可靠性、产品质量的可控性和安全性。目前，Vero细胞无血清培养已在包括狂犬病疫苗、流行性乙型脑炎疫苗、流感疫苗、肾综合征出血热疫苗、甲型肝炎疫苗、呼肠病毒疫苗等的研发和生产中得到应用。

无血清培养基是在基础培养基的基础上，加入成分明确的血清替代成分，既能满足细胞的培养要求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素。因此，发展无血清培养基是细胞走向临床应用的重要条件。目前已有一些市售的无血清培养基，如Sigma公司的EX-CELLMDCK和GIBCD公司的VP-SFM，但是现有市售无血清培养基存在细胞贴壁性差、细胞增殖不够理想、价格昂贵、成分不明等缺陷。

中国专利申请号为200710187466.7的专利，公开了一种用于Vero细胞的培养基及其培养方法，该培养基以SFM为基础培养基，添加的细胞因子及其他组分50多种，组分非常复杂。

因此，现有技术存在细胞贴壁性差，组分过于复杂，细胞增殖速率不够理想等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种质量可控、安全可靠、成分简单的培养Vero细胞用的无血清培养基及其制备方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种培养Vero细胞用的无血清培养基，其特征在于：所述培养基由以下按体积百分数计的成分组成：基础培养液85-95%、氨基酸溶液2-5%、血清替代因子溶液2-7%、抗氧化剂溶液0.1-0.5%、酵母抽提物溶液0.8-2%、乙醇胺溶液0.1-0.5%；

所述基础培养液选自MEM培养基、DMEM培养基、DMEM-F12培养基（1:1）、HB培养基、BEM培养基中的一种；

所述氨基酸溶液中的溶剂为基础培养液，溶质由以下重量的成分组成：赖氨酸0.5-1g、色氨酸0.5-1.5g、苯异亮氨酸0.5-1g、缬氨酸0.5-1g、亮氨酸0.5-1.5g、甘氨酸0-1g、异亮氨酸0.5-1.5g、苏氨酸0-1g、丝氨酸0.5-1g、精氨酸0.5-1g、天冬氨酸0-1g和谷氨酰胺0.5-1g；

所述血清替代因子溶液中溶剂为基础培养液，溶质为生长因子、结合蛋白和贴壁因子中的一种或几种组合；

所述抗氧化剂溶液中溶剂为基础培养液，溶质为抗坏血酸、谷胱甘肽、维生素E、类胡萝卜素、尿酸、枸橼酸、EDTA、泛醌和多酚类抗氧化剂中的一种；

所述酵母抽提物溶液溶剂为PBS，溶质为酵母提取物；

所述乙醇胺溶液溶剂为PBS，溶质为乙醇胺。

进一步地，所述抗氧化剂溶液的浓度为0.5-2mg/L；

所述酵母抽提物溶液的浓度为4-10mg/L；

所述乙醇胺溶液的浓度为0.5-2mL/L。

进一步地，所述血清替代因子的溶质由生长因子、结合蛋白和贴壁因子以配比为(0.2-1):(0-1):(0.4-1)混合所得的混合物。

进一步地，所述生长因子为胰岛素、白介素-2、表皮生长因子、成纤维生长因子、皮质醇和甲状腺激素中的一种或几种组合；

所述结合蛋白为转铁蛋白、磷蛋白、脂蛋白、糖蛋白、金属蛋白和色蛋白中的一种或几种组合；

所述贴壁因子为鱼精蛋白、聚赖氨酸、糖蛋白、球蛋白和脂蛋白中的一种或几种组合。

优选地，一种培养Vero细胞用的无血清培养基，其特征在于：所述培养基由以下按体积百分数计的成分组成：基础培养液90%、氨基酸溶液4%、血清替代因子溶液5%、抗氧化剂溶液0.1%、酵母抽提物溶液0.8%、乙醇胺溶液0.1%；