[发明专利]一种培养Vero细胞用的无血清培养基及其制备方法

权利要求书

1.一种培养Vero细胞用的无血清培养基，其特征在于：所述培养基由以下按体积百分数计的成分组成：基础培养液85-95%、氨基酸溶液2-5%、血清替代因子溶液2-7%、抗氧化剂溶液0.1-0.5%、酵母抽提物溶液0.8-2%、乙醇胺溶液0.1-0.5%。

2.如权利要求1所述的培养Vero细胞用的无血清培养基，其特征在于：

所述基础培养液选自MEM培养基、DMEM培养基、DMEM-F12培养基（1:1）、HB培养基、BEM培养基中的一种；

所述氨基酸溶液中的溶剂为基础培养液，溶质由以下重量的成分组成：赖氨酸0.5-1g、色氨酸0.5-1.5g、苯异亮氨酸0.5-1g、缬氨酸0.5-1g、亮氨酸0.5-1.5g、甘氨酸0-1g、异亮氨酸0.5-1.5g、苏氨酸0-1g、丝氨酸0.5-1g、精氨酸0.5-1g、天冬氨酸0-1g和谷氨酰胺0.5-1g；

所述血清替代因子溶液中溶剂为基础培养液，溶质为生长因子、结合蛋白和贴壁因子中的一种或几种；

所述抗氧化剂溶液中溶剂为基础培养液，溶质为抗坏血酸、谷胱甘肽、维生素E、类胡萝卜素、尿酸、枸橼酸、EDTA、泛醌和多酚类抗氧化剂中的一种；

所述酵母抽提物溶液溶剂为PBS，溶质为酵母提取物；

所述乙醇胺溶液溶剂为PBS，溶质为乙醇胺。

3.如权利要求1所述的培养Vero细胞用的无血清培养基，其特征在于：所述培养基由以下按体积百分数计的成分组成：基础培养液90%、氨基酸溶液4%、血清替代因子溶液5%、抗氧化剂溶液0.1%、酵母抽提物溶液0.8%、乙醇胺溶液0.1%；

所述氨基酸溶液中的溶剂为基础培养液，溶质由以下重量的成分组成：赖氨酸0.5g、色氨酸1g、苯异亮氨酸0.5g、缬氨酸1g、亮氨酸1g、甘氨酸0.5g、异亮氨酸1g、苏氨酸0.5g、丝氨酸0.5g、精氨酸1g、天冬氨酸0.5g和谷氨酰胺0.5g；

所述血清替代因子溶液中溶剂为基础培养液，溶质为生长因子、结合蛋白和贴壁因子的混合物；

所述抗氧化剂溶液的浓度为0.5-2mg/L；

所述酵母抽提物溶液的浓度为4-10mg/L；

所述乙醇胺溶液的浓度为0.5-2mL/L。

4.如权利要求1-3任一所述的培养Vero细胞用的无血清培养基，其特征在于，所

述血清替代因子的溶质由生长因子、结合蛋白和贴壁因子以配比为(0.2-1):(0-1):(0.4-1)混合所得的混合物。

5.如权利要求4所述的培养Vero细胞用的无血清培养基，其特征在于，

所述生长因子为胰岛素、白介素-2、表皮生长因子、成纤维生长因子、皮质醇和甲状腺激素中的一种或几种；

所述结合蛋白为转铁蛋白、磷蛋白、脂蛋白、糖蛋白、金属蛋白和色蛋白中的一种或几种；

所述贴壁因子为鱼精蛋白、聚赖氨酸、糖蛋白、球蛋白和脂蛋白中的一种或几种。

6.如权利要求1-5任一所述的培养Vero细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于，

所述制备方法步骤为：分别取配方量的基础培养液、氨基酸溶液、血清替代因子溶液、抗氧化剂溶液、酵母抽提物溶液和乙醇胺溶液，混合，即得。

7.如权利要求6所述的培养Vero细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于，

所述氨基酸溶液由如下方法制成：取配方量的赖氨酸、色氨酸、苯异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸、精氨酸、天冬氨酸和谷氨酰胺，然后溶在配方量的基础培养液，即得。

8.如权利要求6所述的培养Vero细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于，

所述血清替代因子溶液由如下方法制成：取配方量的由生长因子、结合蛋白和贴壁因子，溶解于配方量的基础培养液，即得；

所述抗氧化剂溶液由如下方法制成：取抗氧化剂，溶解于基础培养液，配成浓度为0.5-2mg/L的溶液，即得。

9.如权利要求6所述的培养Vero细胞用的无血清培养基的制备方法，其特征在于，所述酵母抽提物溶液由如下方法制成：取酵母抽提物，溶解于PBS，配成浓度为4-10mg/L的溶液，即得；

所述乙醇胺溶液由如下方法制成：取乙醇胺，溶解于PBS，配成浓度为0.5-2mL/L的溶液，即得。

10.如权利要求1-9任一所述的培养Vero细胞用的无血清培养基在培养Vero细胞中的用途。