[发明专利]一种量子点标记的生物体siRNA药物载体系统

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物载体，尤其是涉及一种量子点标记的生物体 siRNA药物载体。

背景技术

RNA干扰是一种细胞内源性的基因沉默机制，RNA干扰是一个有 选择性的沉默机制，但是外源siRNA进入细胞的能力非常低，这对于它 的理论治疗是一个障碍，如何设计有效的siRNA进入细胞的途径，对于 治疗疾病是一个非常关键的因素。在siRNA进入细胞的途径中，传递载 体必须有效的能够与核酸复合，并且有助于克服进入细胞的障碍，以及 较小的细胞毒性等等。

目前，一系列的分子，包括脂质体，多肽等已经被证实了它们在传 递DNA和RNA的有效性。成功的siRNA载体需要能够跟核酸复合，需 要带有正电荷，含有高的缓冲能力，展示低的细胞毒性，并且含有能够 被修饰的化学基团，或者修饰其它的分子基团。研究表明，阳离子脂质 体DC-Chol/DOPE已经成功地用于DNA药物的体内传送。DC-Chol介 导siRNA对Hela细胞的转染与商品化的转染试剂lipofectamine2000一 样高效，毒性虽然较lipofectamine2000小，但也是比较大的。使siRNA 进入细胞的方法，一种是传递编码siRNA序列的DNA或者RNA的模板 到细胞里面去，然后转入成siRNA。这些基于DNA-和RNA-编码序列的 siRNA表达系统是通过质粒或者病毒携带进细胞的。另一种是直接携带 siRNA进入细胞的方法。直接携带siRNA进入细胞的方法中存在着相容 性差，存在细胞毒性以及靶向性差的缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种量子点标记的生物体siRNA药物载体系 统，开创性的将量子点PAMAM/HA/siRNA复合体系连接，增加了药物 靶向位点的新方法，跟踪药物作用途径的新方法，其具有简化跟踪监测 过程、降低了标记物对激光发射源的要求，同时跟踪多个作用靶标点， 实现药效靶点的跟踪，具有省时、高效、灵敏度高的优点。

为解决上述技术问题，本发明提供一种量子点标记的生物体siRNA 药物载体系统，其包括一分子的PAMAM分子，该PAMAM分子上结合 有一个含有21个碱基对的双链siRNA以及透明质酸分子形成 PAMAM/HA/siRNA复合体系；

所述PAMAM/HA/siRNA复合体系中的透明质酸分子还连接PEG (NH₂)₂分子，该PEG(NH₂)₂与量子点连接形成量子点标记的生物 体siRNA药物载体系统。

所述量子点为CdSe量子点，所述CdSe量子点上带有羧基，所述 CdSe量子点通过该羧基与PEG(NH₂)₂上的氨基连接。

所述透明质酸通过静电吸引的作用与所述PAMAM分子结合。

所述透明质酸的电荷与所述PAMAM分子电荷比为0.4-0.6。

所述PAMAM溶解在pH为7的缓冲液中通过正负电荷之间的作用 与双链siRNA连接。

所述PAMAM/HA/siRNA复合体系中，透明质酸的羧基被DCC和 NHS活化后与PEG-(NH₂)₂的一个氨基结合，得到(PAMAM/HA/siRNA) -PEG-NH₂。

所述量子点溶液经纯化后稀释于5×10^-2磷酸纳缓冲液中，取适量 (PAMAM/HA/siRNA)-PEG-NH₂加入量子点溶液中，室温下搅拌反应 0.2h，形成量子点标记的PAMAM/HA/siRNA复合体系。

本发明具有以下有益技术效果：