[发明专利]一种基于RPA检测检疫性茄属杂草银毛龙葵的方法

权利要求书

1.用于鉴定银毛龙葵的引物对，为如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对；

(b)由将序列表中序列1和序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的两条单链DNA分子组成的，且与(a)中所述引物对功能相同的引物对。

2.用于鉴定银毛龙葵的重组酶介导等温扩增试剂，包括能结合单链核酸的重组酶、单链DNA结合酶、链置换型DNA聚合酶、dNTPs、醋酸镁和权利要求1所述的引物对。

3.用于鉴定银毛龙葵的重组酶介导等温扩增试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有权利要求1所述的引物对或权利要求2所述的试剂。

4.权利要求1所述的引物对或权利要求2所述的试剂或权利要求3所述的试剂盒在鉴定银毛龙葵中的应用。

5.一种鉴定或辅助鉴定待测植物样品是否来自于银毛龙葵的方法，包括如下步骤：

(1)从待测植物样品中提取基因组DNA作为模板，采用权利要求1所述的引物对进行重组酶介导等温扩增，得到扩增产物；

(2)按照如下方法确定所述待测植物样品是否来自于银毛龙葵：若所述扩增产物中含有210bp的DNA片段，则所述待测植物样品来自于或候选来自于银毛龙葵；若所述扩增产物中不含有210bp的DNA片段，则所述待测植物样品不来自于或候选不来自于银毛龙葵。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，进行所述重组酶介导等温扩增的反应条件为：37-42℃恒温反应10-30min。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述210bp的DNA片段为序列表中序列3所示DNA片段。

8.根据权利要求5-7中任一所述的方法，其特征在于：所述待测植物样品来自于银毛龙葵、北美刺龙葵、刺萼龙葵或水茄。

9.根据权利要求5-8中任一所述的方法，其特征在于：所述待测植物样品为所述待测植物的叶和/或茎和/或种子。

10.权利要求1所述引物对的制备方法，包括将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装的步骤；

或

权利要求2所述试剂的制备方法，包括将所述能结合单链核酸的重组酶、所述单链DNA结合酶、所述链置换型DNA聚合酶、所述dNTPs、所述醋酸镁和组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装的步骤。