[发明专利]鸭支原体培养基及鸭支原体的分离纯化方法

权利要求书

1.鸭支原体培养基，其特征在于：由液体培养基和固体培养基组成，

所述液体培养基配方为：10%的醋酸铊溶液4.5-6mL/L，PPLO肉汤3-5g/L，葡萄糖4-6g/L，蛋白胨4-6g/L，胰蛋白胨8-10g/L，1%的酚红2-3mL/L，含L-谷氨酰胺的CMRL-1066培养基450-500 mL/L，灭活的马血清150-180mL/L，酵母浸出液45-55mL/L，青霉素200-300万单位/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2g/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.1-0.2g/L，余量为去离子水；

所述固体培养基配方为：10%的醋酸铊溶液4.5-6mL/L，PPLO肉汤3-5g/L，葡萄糖4-6g/L，蛋白胨4-6g/L，胰蛋白胨8-10g/L，琼脂粉10-12g/L，含L-谷氨酰胺的CMRL-1066培养基450-500 mL/L，灭活的马血清150-180mL/L，酵母浸出液45-55mL/L，青霉素200-300万单位/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2g/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.1-0.2g/L，余量为去离子水。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述液体培养基由以下组分组成：10%的醋酸铊溶液4.8mL/L，PPLO肉汤3g/L，葡萄糖5g/L，蛋白胨4.8g/L，胰蛋白胨10g/L，1%的酚红2mL/L，含L-谷氨酸的CMRL-1066培养基450mL/L，灭活的马血清180mL/L，酵母浸出液45mL/L，青霉素300万单位/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.2g/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.2g/L，余量为去离子水。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述固体培养基由以下组分组成：10%的醋酸铊溶液4.8mL/L，PPLO肉汤3g/L，葡萄糖5g/L，蛋白胨4.8g/L，胰蛋白胨10g/L，琼脂粉12g/L，含L-谷氨酸的CMRL-1066培养基450mL/L，灭活的马血清180mL/L，酵母浸出液45mL/L，青霉素300万单位/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.2g/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.2g/L，余量为去离子水。

4.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于：所述固体培养基由以下组分组成：10%的醋酸铊溶液4.8mL/L，PPLO肉汤3g/L，葡萄糖5g/L，蛋白胨4.8g/L，胰蛋白胨10g/L，琼脂粉12g/L，含L-谷氨酸的CMRL-1066培养基450mL/L，灭活的马血清180mL/L，酵母浸出液45mL/L，青霉素300万单位/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.2g/L，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.2g/L，余量为去离子水。

5.根据权利要求1-4任一所述的培养基，其特征在于：所述酵母浸出液的制备方法为：将酵母溶于5倍去离子水中，在30℃下磁力搅拌1小时；10-15分钟内逐渐增加温度到40℃；之后每分钟增加5℃至沸点，煮沸3-5分钟，冷却至室温，离心，取上清，依次经0.8 μm、0.45μm、0.22 μm的滤器过滤后收集滤液即得。

6.根据权利要求1-3任一所述的培养基，其特征在于：除添加琼脂粉，去掉酚红指示剂外，所述固体培养基其余组分和各组分含量均与液体培养基相同。

7.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于：除添加琼脂粉，去掉酚红指示剂外，所述固体培养基其余组分和各组分含量均与液体培养基相同。

8.权利要求1-7任一所述的培养基的制备方法，其特征在于：所述液体培养基的制备方法为：将配方量的去离子水，10%的醋酸铊溶液，PPLO肉汤，葡萄糖，蛋白胨，胰蛋白胨，1%的酚红充分混匀，调pH值为7.8，121℃高压灭菌15分钟，冷却至50-55℃，加入配方量的无菌的含L-谷氨酰胺的CMRL-1066培养基，灭活的马血清，酵母浸出液，无菌的青霉素水溶液，无菌的L-半胱氨酸盐酸盐水溶液以及无菌的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸水溶液；最后微调pH值至7.7-7.8。