[发明专利]鸭支原体培养基及鸭支原体的分离纯化方法有效
申请号: | 201510950317.6 | 申请日: | 2015-12-18 |
公开(公告)号: | CN105462884B | 公开(公告)日: | 2018-12-04 |
发明(设计)人: | 宫晓炜;刘永生;陈启伟;郑福英;储岳峰 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N1/02;C12R1/35 |
代理公司: | 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 | 代理人: | 吕玉博 |
地址: | 730000 甘肃*** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 支原体 培养基 分离 纯化 方法 | ||
1.鸭支原体培养基,其特征在于:由液体培养基和固体培养基组成,
所述液体培养基配方为:10%的醋酸铊溶液4.5-6mL/L,PPLO肉汤3-5g/L,葡萄糖4-6g/L,蛋白胨4-6g/L,胰蛋白胨8-10g/L,1%的酚红2-3mL/L,含L-谷氨酰胺的CMRL-1066培养基450-500 mL/L,灭活的马血清150-180mL/L,酵母浸出液45-55mL/L,青霉素200-300万单位/L,L-半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2g/L,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.1-0.2g/L,余量为去离子水;
所述固体培养基配方为:10%的醋酸铊溶液4.5-6mL/L,PPLO肉汤3-5g/L,葡萄糖4-6g/L,蛋白胨4-6g/L,胰蛋白胨8-10g/L,琼脂粉10-12g/L,含L-谷氨酰胺的CMRL-1066培养基450-500 mL/L,灭活的马血清150-180mL/L,酵母浸出液45-55mL/L,青霉素200-300万单位/L,L-半胱氨酸盐酸盐0.1-0.2g/L,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.1-0.2g/L,余量为去离子水。
2.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于:所述液体培养基由以下组分组成:10%的醋酸铊溶液4.8mL/L,PPLO肉汤3g/L,葡萄糖5g/L,蛋白胨4.8g/L,胰蛋白胨10g/L,1%的酚红2mL/L,含L-谷氨酸的CMRL-1066培养基450mL/L,灭活的马血清180mL/L,酵母浸出液45mL/L,青霉素300万单位/L,L-半胱氨酸盐酸盐0.2g/L,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.2g/L,余量为去离子水。
3.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于:所述固体培养基由以下组分组成:10%的醋酸铊溶液4.8mL/L,PPLO肉汤3g/L,葡萄糖5g/L,蛋白胨4.8g/L,胰蛋白胨10g/L,琼脂粉12g/L,含L-谷氨酸的CMRL-1066培养基450mL/L,灭活的马血清180mL/L,酵母浸出液45mL/L,青霉素300万单位/L,L-半胱氨酸盐酸盐0.2g/L,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.2g/L,余量为去离子水。
4.根据权利要求2所述的培养基,其特征在于:所述固体培养基由以下组分组成:10%的醋酸铊溶液4.8mL/L,PPLO肉汤3g/L,葡萄糖5g/L,蛋白胨4.8g/L,胰蛋白胨10g/L,琼脂粉12g/L,含L-谷氨酸的CMRL-1066培养基450mL/L,灭活的马血清180mL/L,酵母浸出液45mL/L,青霉素300万单位/L,L-半胱氨酸盐酸盐0.2g/L,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.2g/L,余量为去离子水。
5.根据权利要求1-4任一所述的培养基,其特征在于:所述酵母浸出液的制备方法为:将酵母溶于5倍去离子水中,在30℃下磁力搅拌1小时;10-15分钟内逐渐增加温度到40℃;之后每分钟增加5℃至沸点,煮沸3-5分钟,冷却至室温,离心,取上清,依次经0.8 μm、0.45μm、0.22 μm的滤器过滤后收集滤液即得。
6.根据权利要求1-3任一所述的培养基,其特征在于:除添加琼脂粉,去掉酚红指示剂外,所述固体培养基其余组分和各组分含量均与液体培养基相同。
7.根据权利要求5所述的培养基,其特征在于:除添加琼脂粉,去掉酚红指示剂外,所述固体培养基其余组分和各组分含量均与液体培养基相同。
8.权利要求1-7任一所述的培养基的制备方法,其特征在于:所述液体培养基的制备方法为:将配方量的去离子水,10%的醋酸铊溶液,PPLO肉汤,葡萄糖,蛋白胨,胰蛋白胨,1%的酚红充分混匀,调pH值为7.8,121℃高压灭菌15分钟,冷却至50-55℃,加入配方量的无菌的含L-谷氨酰胺的CMRL-1066培养基,灭活的马血清,酵母浸出液,无菌的青霉素水溶液,无菌的L-半胱氨酸盐酸盐水溶液以及无菌的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸水溶液;最后微调pH值至7.7-7.8。
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