[发明专利]黑曲霉（Aspergillus niger）An-19菌株及其用于洛伐他汀的生产的用途和发酵方法

说明书

本发明属于生物技术微生物领域，涉及1株液体发酵生产Lovastatin的黑曲霉（Aspergillus niger）An‑19菌株、用途和发酵生产方法。黑曲霉（Aspergillus niger）An‑19菌株，保藏编号为：CCTCC M 2015673，保藏地为：中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2015年11月11日。本发明所涉及的An‑19菌株筛选自自然发酵的稻谷，经形态特征和18S rDNA基因序列分析，鉴定为黑曲霉（Aspergillus niger）。经培养基配方和培养条件优化后，5 L发酵罐发酵116 h，Lovastatin产量可达267.02 mg/L。

技术领域

本发明属于生物技术微生物领域，涉及1株液体发酵生产Lovastatin的黑曲霉（Aspergillus niger）An-19菌株、用途和发酵生产方法。

背景技术

黑曲霉（Aspergillus niger）是在自然界广泛存在的一种丝状真菌，属半知菌门、丝孢纲（Hyphomycetes）、丛梗孢目（Moniliales）、丛梗孢科（Moniliaceae）。广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中，生长适宜 pH 为3~7。是重要的工业发酵菌种，可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、葡糖酸和没食子酸等。也是美国食品药品监督局（FDA）认定的GRAS（Generally Regarded As Safe）菌株之一，在有机酸、工业酶制剂方面应用广泛。此外有些菌株还会产生具有重要应用价值的生理活性物质如Lovastatin等。

1980年，Alberts等从土曲霉（Aspergillus terreus）中提取到称为洛伐他汀（Lovastatin）的化合物。Lovastatin是降血脂的他汀类药物，具有抑制体内生物合成胆固醇的关键酶-羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMG）的活性，可用于治疗心血管疾病。美国和日本等国家通过发酵的方式开发出一系列的Lovastatin药物，但我国对降脂曲霉的研究生产中普遍存在产量偏低、生产成本偏高等问题。究其原因主要是缺乏优良的生产菌株和适宜的发酵工艺。因而筛选出高产Lovastatin的曲霉菌株并对其发酵工艺进行优化，具有良好的理论意义和应用前景。

本发明所筛选的黑曲霉（Aspergillus niger）An-19菌株，具有高产Lovastatin、生长速度快、培养方法简单等优良特性。在发酵培养基初始pH为5.5，培养温度为26℃条件下，An-19菌株通过液体发酵培养基和发酵条件优化后，5 L发酵罐发酵116 h，Lovastatin产量可达267.02 mg/L。

发明内容

针对市场上Lovastatin需求日益增长，生产Lovastatin优良工业菌株的缺乏等的问题。本发明的目的是提供1株高产Lovastatin黑曲霉（Aspergillus niger）An-19菌株和发酵生产Lovastatin的方法。

本发明所述黑曲霉（Aspergillus niger）An-19菌株，保藏编号为：CCTCC M2015673，保藏地为：中国典型培养物保藏中心，中国武汉大学。保藏日期为：2015年11月11日。

黑曲霉（Aspergillus niger）An-19菌株的形态特征：PDA培养基上的菌落初期为白色绒毛状，后变成黑褐色粉粒状，15 d菌落直径达60 mm，有环形沟纹；显微镜观察菌丝光滑，有隔膜，直径6 μm~8 μm的分支状；分生孢子头丰富，黑褐色，球状，直径150 μm～350 μm；分生孢子梗茎长短不一，壁较薄，光滑黄褐色；顶囊膨大成球形，双层小梗；分生孢子呈褐色球形或近球形，表面粗糙，直径4~5 μm×4~4.5 μm。