[发明专利]一种水样中四环素类抗生素的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗生素的测定方法，特别是涉及一种水样中四环素类抗生素的检测方法。

背景技术

四环素类抗生素(Tetracycline antibiotics，TCs)是由放线菌产生的一类广谱抗生素，包括四环素、土霉素、金霉素等，被广泛用于人类的疾病的治疗以及畜禽养殖业。由于四环素类抗生素的大量使用，且其在生物活体中的不完全代谢而被排泄至水环境中，故水环境中四环素类抗生素的量逐步积累，可能激发微生物的选择性遗传变异而导致出现抗生素耐药病原体，对环境微生物种群造成危害，并进而对水体系统产生不可逆转的破坏。

现有技术中，用于检测四环素类抗生素的方法有荧光分析法、毛细管电泳法、免疫分析法、薄层色谱法、液相色谱法和高效液相色谱-质谱联用法等。例如高效液相色谱-质谱联用法具有分离和检测特点，被越来越多的用于四环素类抗生素残留的检测。现有公开的检测方法，对于水体中痕量或超痕量的四环素类抗生素的检测显得无能为力。

现有关于四环素类残留的研究，偏重于分析检测。由于的特点，建立有效快速的分离富集技术对抗生素残留污染监控十分重要。

因此，有希望开发一种能够检测水体中痕量或超痕量的四环素类抗生素的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够检测水体中痕量或超痕量的四环素类抗生素的方法。

本发明提供如下技术方案：

一种水样中四环素类抗生素的检测方法，所述方法包括如下步骤：

(1)样品的预处理：

往水样中加入磁性材料，进行磁固相萃取；萃取结束后过滤水样得到磁性材料；往磁性材料中加入pH＝9～11的洗脱剂进行超声洗脱，形成洗脱液；将洗脱液进行滤膜过滤，得到滤液；

(2)检测方法：

使滤液通过高效液相色谱和串联质谱以测定滤液中的四环类抗生素；

所述液相色谱的条件为：

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18[(3.0～5.0mm)×(100～250mm)，1.8μm]，流动相：乙腈和1％体积浓度的乙酸水溶液，柱温：25～35℃，流速：0.3～0.5mL/min，进样量：5～10μL，所述质谱条件为：

干燥气温度：280～320℃，干燥气流速：1～5l/min，雾化气压力：40～45psi，毛细管电压：3000～4000V，喷嘴电压：100～2000V；

所述四环素类抗生素包括选自差向四环素(ETC)、土霉素(OTC)、四环素(TC)、去甲金霉素(DMC)、金霉素(CTC)和脱水四环素(ATC)中的一种、两种或三种以上的组合。

本发明提供的水样中四环素类抗生素的检测方法，在样品检测前需要先对样品进行预处理。预处理方法包括：往水样中加入磁性材料，进行磁固相萃取；萃取结束后过滤水样得到磁性材料；往磁性材料中加入pH＝9～11的洗脱剂进行超声洗脱，形成洗脱液；将洗脱液进行滤膜过滤，得到滤液。优选的是，磁性材料的用量为1～25mg磁性材料/100mL水样，洗脱剂选自pH＝9～11的氨水溶液，萃取温度为10～60℃，萃取时间为1～60min，滤膜为≤0.45μm的滤膜。

本发明提供的水样中四环素类抗生素的检测方法，在样品预处理好后，通过高效液相色谱和串联质谱以测定滤液中的四环类抗生素的含量。

所述液相色谱的测试条件为：

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18[(3.0～5.0mm)×(100～250mm)，1.8μm]，流动相：乙腈和1％体积浓度的乙酸水溶液，柱温：25～35℃，流速：0.3～0.5mL/min，进样量：5～10μL，梯度洗脱。

优选的是，色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C₁₈(3.0mm×100mm，1.8μm)，流动相：乙腈和1％(v/v)乙酸水溶液，柱温：35℃，流速：0.3mL/min，进样体积：10μL。

上述梯度洗脱，优选的是，按照下表1进行：

表1

所述质谱的测试条件为：

干燥气温度：280～320℃，干燥气流速：1～5l/min，雾化气压力：40～45psi，毛细管电压：3000～4000V，喷嘴电压：100～2000V。

优选的是，干燥气温度：300℃，干燥气流速：5l/min，雾化气压力：45psi，毛细管电压：3500V，喷嘴电压：1000V。