[发明专利]用于菌种保藏的保藏液及重组大肠杆菌高密度发酵方法

权利要求书

1.一种用于菌种保藏的保藏液，其特征在于：由缓冲溶液和溶解于缓冲溶液中的溶质组成，所述缓冲溶液为pH值6.2-7.0的磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液，所述溶质包括低聚糖、甘油、甘露醇、脱脂奶粉和琼脂糖。

2.根据权利要求1所述的保藏液，其特征在于：所述低聚糖选自海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的至少一种。

3.根据权利要求1或2所述的保藏液，其特征在于：所述溶质中包括100重量份的低聚糖，30-40重量份的甘油，50-60重量份的甘露醇，180-200重量份的脱脂奶粉，0.5-0.8重量份的琼脂糖。

4.根据权利要求1或2所述的保藏液，其特征在于：所述保藏液中，所述缓冲溶液和所述溶质的重量比为1:(8-15)。

5.一种如权利要求1-4任一项所述的保藏液在重组大肠杆菌的菌种保藏中的应用。

6.一种如权利要求1-4任一项所述的保藏液在基因工程菌的高密度发酵中的应用。

7.一种重组大肠杆菌的高密度发酵方法，其特征在于：包括采用三级菌种保藏方法建立原始菌种库、主代菌种库和工作菌种库，所述工作菌种库采用权利要求1-4任一项所述的保藏液，保存于-80℃至26℃，优选的保存于0℃-26℃；并且，采用所述工作菌种库的菌种进行高密度发酵，所述高密度发酵依序包括划线培养、摇床活化培养、种子液培养、种子罐培养和发酵罐培养。

8.根据权利要求7所述的高密度发酵方法，其特征在于：所述工作菌种库采用权利要求1-4任一项所述的保藏液，保存于4℃-10℃。

9.根据权利要求7所述的高密度发酵方法，其特征在于：所述原始菌种库和/或主代菌种库也是采用权利要求1-4任一项所述的保藏液，保存于-80℃至26℃，优选的保存于0℃-26℃。

10.根据权利要求7-9任一项所述的高密度发酵方法，其特征在于：所述发酵罐培养包括，将所述种子罐培养的菌液接种到发酵罐中进行通气搅拌培养，所述通气搅拌培养的初始培养条件为，转速100-150rpm，通气量0.9-1.2vvm，温度35-37℃，罐压0.03-0.05MPa；当溶氧低于20％时，提高转速至200-800rpm，提高通气量至1.5-2.5vvm；当发酵OD600至30以上时，加入诱导剂，同时，将发酵罐温度由35℃-37℃降为25℃-27℃，继续培养至发酵结束；整个发酵过程中，调节补料速度，使pH值保持7.0-7.1；所述诱导剂为异丙基硫代半乳糖苷。